[发明专利]一种基于Cpf1的DNA体外拼接方法有效
| 申请号： | 201610877438.7 | 申请日： | 2016-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN107881184B | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 王金;雷超;赵国屏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/10;C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;马莉华 |
| 地址： | 200032 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于Cpf1的DNA体外拼接方法。所述方法通过设计并合成能够被CRISPR‑Cpf1识别的特异crRNA序列来引导Cpf1特异地将双链DNA的特定位置切开并生成预设的粘性末端。利用本发明的方法,可方便、快捷、准确地获得预定的粘性末端，对DNA进行拼接。使用本发明的方法能够对DNA进行工程化、标准化、模块化的改造或组装。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 cpf1 dna 体外 拼接 方法 | ||
【主权项】：
一种核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物包括：(a)第一核酸构建物，所述第一核酸构建物为双链DNA构建物，并且所述第一核酸构建物的序列中含有至少一个式I所示的Cpf1识别切割元件；D1‑D2‑D3 (I)式中，D1为前间区序列邻近基序PAM；D2为长度N2个核苷酸的Cpf1识别区，其中，N2为正整数14、15、16或17；D3为长度为N3个核苷酸的Cpf1切割区，其中，N3为4‑10的正整数；以及(b)第二核酸构建物，所述第二核酸构建物为RNA构建物，并且所述所述第二核酸构建物为结构如式II所示的crRNA元件；R1‑R2‑R3 (II)式中，R1为5'的发夹区；R2为长度M2个核苷酸的、与D2互补的Cpf1识别引导区，其中M2为正整数14、15、16或17；R3为无、或长度为M3个核苷酸的切割定位区，其中M3为1‑20的正整数；并且，所述的D3的序列与所述R3的序列是不匹配的。
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