[发明专利]一种体外蛋白质合成的试剂盒及其制备方法

摘要

本发明提供了一种酵母细胞提取液的制备方法、酵母细胞提取液和利用所述的酵母细胞提取液在体外体系中合成蛋白质的方法，以及含有所述的酵母细胞提取液的试剂盒，该试剂盒可以用于体外体系中蛋白质合成，比传统方法简便；无需转化、培养、破碎；节省大量使用时间和成本；可表达的蛋白质种类多,不受蛋白毒性影响；可表达多种蛋白质复合物，无需37℃高温。另外，本发明的中所使用的原料酵母细胞，培养简单，操作方便，繁殖迅速，成本较低，制备得到的酵母提取物具有蛋白质翻译后修饰的能力，适合大规模制备，具有工业生产的优势；采用真空冷冻干燥法把酵母细胞提取物制成冻干粉低温或常温保存，便于运输。

主权项

1.一种体外蛋白质合成试剂盒中酵母细胞提取物的制备方法，具体包括以下几个步骤：a) 挑取酵母菌单菌落，所述酵母菌为乳酸克鲁维酵母，接种于YPD培养基中；b) 在OD600=3.0‑6.9时，离心收获酵母细胞；c) 菌体收获后采用Buffer A 进行重悬，重悬2‑4次，所述Buffer A由20‑30 mM pH为7.4的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸钾, 100‑200 mM醋酸钾，1‑2 mM醋酸镁，2 mM二硫苏糖醇，0.5 mM苯甲基磺酰氟组成；d) 菌体采用高压破碎或者搅拌机破碎；e) 把步骤d中收获的酵母细胞提取物进行离心2‑4次，离心力在30000‑100000×g；f) 离心后，取中间层的酵母细胞提取物，透析后，除去分子量不超过2 KDa的胞内组分，并将所得溶液浓缩，分装；g) 液氮速冻，‑80℃保存；h）或液氮速冻后，使用冷冻干燥机器冻干, 制成水分<5%的干粉后，密闭低温或室温保存。