[发明专利]一种生物酶法去角质化面膜制作及使用方法

摘要

本发明公开了一种生物酶法去角质化面膜制作及使用方法，本发明通过生物酶法面膜原料的预处理、制备角蛋白酶、酶作用条件优化、角蛋白酶结合到棉籽绒材质面膜、角蛋白酶低温保存和面膜室温使用一系列步骤实现。本发明充分利用角蛋白降解菌—嗜麦芽窄食假单胞菌(Microbacterium sp.TSMC‑99)发酵生产角蛋白酶，吸附在面膜上的角蛋白酶催化皮肤部分角质化组织降解，去除脸上的角质化皮屑，去除肌肤死皮、滋润脸部，使皮肤清晰明亮，起到嫩肤作用。生物酶法去角质化面膜是一种无毒、无污染，无副作用，安全性高的生物高科技产品。并且生产条件温和、环保，操作简便，易推广，成本低，所制面膜其技术指标符合轻工行业标准“QB/T 2872‑2007面膜”的规范。

主权项

1.一种生物酶法去角质化面膜制作方法，其特征在于，包括以下步骤:(1) 角蛋白酶诱导原料的预处理：酪蛋白粉碎，高压蒸汽灭菌20~30min，然后烘箱80℃烘干至恒重；(2)、制备微生物发酵菌剂:产角蛋白酶细菌按0.5~1%接种量接种于Luria‑Bertani培养基中，160转速/分钟，震荡培养24小时活化；然后按2~4%接种量接种于Luria‑Bertani培养基中，160转/分钟，震荡培养到对数期OD600 0.4~0.6,OD:光密度得到产角蛋白酶细菌菌剂；(3)、产角蛋白酶细菌生产角蛋白酶：预处理酪蛋白8~18g/L，K2HPO4 1.4 g/L，KH2PO4 0.7 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4 0.1g/L，pH6.5~8.5，表面活性剂吐温‑80 0.5%，置发酵罐于121℃灭菌30 分钟，待培养基冷却到37℃后，加入2~4%的羽毛降解菌剂，发酵温度27~37℃，通气气压为0.07~0.09 M Pa，空气流量为0.8 ~1.0L/L·min，100~120小时完成；(4)、粗酶蛋白分离：发酵液7000 转速/分钟、4℃、离心10~20分钟取其上清液得粗酶液，加入硫酸铵固体进行盐析分离，使其浓度在40~55%之间，5000 转速/分钟、4℃、离心5~10分钟，沉淀为粗酶蛋白；(5)、角蛋白酶纯化：粗酶蛋白加无菌纯水稀释到45~65mg/ml，分离的酶蛋白过交联葡聚糖G‑100凝胶柱，pH7.5的0.2 M ，M：摩尔质量，PBS磷酸缓冲盐溶液平衡并洗脱柱子，流速0.4 ml/min，分小管收集十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳检测并测定酶活，调节浓度到160U/ml，加入1~5mmol/L乙二胺四乙酸二钠，角蛋白酶‑20℃保存；(6)、去角质化面膜制作：室温下，取出保存的酶溶液10ml，均匀滴加在一张折叠的棉籽绒材质面膜，轻揉面膜，液体吸附在面膜上；所述的产角蛋白酶细菌为嗜麦芽窄食假单胞菌，Microbacterium sp.TSMC‑99。