[发明专利]一种培养籼稻愈伤组织的方法

摘要

本发明公开了一种培养籼稻愈伤组织的方法，该方法以沪旱1B、沪旱11B、旱恢3号、旱恢7号、沪旱15等5个籼稻品种为材料，分别研究了相同培养基不同光照条件下籼稻品种愈伤组织诱导率、愈伤生长量及分化率的差异，以及相同光照条件不同培养基的籼稻品种愈伤诱导率、愈伤生长量及分化率的差异。结果表明，不同光照条件下，各品种出愈率及愈伤生长量的差异极显著，分化率差异显著；光下籼稻愈伤的出愈率平均在92％以上，暗下出愈率平均也在85％以上，比一般培养方案的出愈率高出2‑3倍。不同培养基条件下，籼稻初生愈伤的诱导率差异不显著，生长量差异显著。籼稻基因型是造成各品种培养力差异显著的主要原因。

主权项

一种培养籼稻愈伤组织的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、籼稻成熟种子的消毒将水稻籼稻品种沪旱1B、沪旱11B、旱恢3号、旱恢7号、沪旱15中饱满成熟的种子经手工去壳或机器脱粒，选择色白、色纯、饱满的米粒用75％的酒精消毒一分钟，再用1.5％的次氯酸钠消毒20‑25分钟，放在摇床上摇，用无菌水冲洗4‑5次；步骤2、不同光照培养条件下诱导籼稻初生愈伤及其分化①将沪旱1B、旱恢7号、沪旱15的种子经消毒后，分别放在加有滤纸的无菌培养皿中置于超净工作台上吹干，然后分别接种到NB的诱导培养基上，每个培养瓶接10‑12粒，接好的种子一部分放在30℃的暗箱中培养，另一部分放在30℃的光培室中培养，光培的时间为每天8:00‑22:00，10天后分别统计各水稻品种各处理的出愈率；②统计完出愈率后，将诱导成功的愈伤组织分离出来直接转移到分化培养基上，每瓶转移愈伤组织6块并置于25℃的光照条件下进行分化，分化期间的光照强度为2000Lx,光照时间为每天14h，25‑30天后分别统计各种水稻品种各处理的分化率；步骤3、不同诱导培养基条件下诱导籼稻初生愈伤及其分化①将沪旱11B、旱恢3号的种子经消毒后分别放在加有滤纸的无菌培养皿中置于超净工作台上吹干，然后每个品种分别接到NB、MB、JAJB的诱导培养基上，每瓶接10粒，并放在30℃的光照条件下培养，光照时间为每天8:00‑22:00，培养10天后分别统计各品种各处理的出愈率；②统计完出愈率后，将诱导成功的愈伤组织分离出来直接转移到分化培养基上，每瓶转移愈伤组织8块并置于25℃的光照条件下进行分化，分化期间的光照强度为2000Lx,光照时间为每天14h，25‑30天后分别统计各种水稻品种各处理的分化率；步骤4、方差分析利用Excel软件中数据分析功能，进行无重复双因素方差分析和显著性检验。