[发明专利]一种利用级联放大效应高敏监测水体PAHs的转荧光蛋白基因斑马鱼的研制方法有效
| 申请号： | 201610802421.5 | 申请日： | 2016-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN106399368B | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 裴得胜;贺超;谢少林;马彦博 | 申请（专利权）人： | 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027;G01N21/64;G01N33/18 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 李艳;许亦琳 |
| 地址： | 400714 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用级联放大效应高敏监测水体PAHs污染物的转荧光蛋白基因斑马鱼的研制方法。所述方法以UAS‑Gal4基因表达调控系统为基础，利用优化重组的多环芳香烃响应元件AhREs驱动上游质粒Gal4的表达，进而对下游UAS质粒中荧光基因eGFP表达进行调控；同时创新性结合TALE‑TF转录激活增强技术，通过TALE转录激活效应进一步增强eGFP基因的表达量，达到多重增加荧光信号的目的；最终利用I‑SceI大范围核酸酶转移系统，可以获得稳定遗传的低拷贝诱导性转荧光蛋白基因斑马鱼，对斑马鱼毒性影响较小。通过制作对环境污染物高敏的转荧光蛋白基因斑马鱼，实现对水体中有毒污染物的简单、高效、灵敏、直观的监测。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马鱼 荧光蛋白基因 放大效应 监测水体 转录激活 级联 质粒 污染物 表达调控系统 大范围核酸酶 生物技术领域 多环芳香烃 环境污染物 毒性影响 稳定遗传 响应元件 荧光基因 荧光信号 转移系统 表达量 创新性 低拷贝 诱导性 灵敏 水体 直观 驱动 上游 调控 监测 制作 优化 | ||
【主权项】：
1.一种监测水体环境污染物的转荧光蛋白基因鱼的培养方法，包括步骤：(1)提供水体环境污染物响应载体，所述水体环境污染物响应载体带有I‑SceI大范围核酸酶转移系统，所述水体环境污染物响应载体包括：水体环境污染物响应元件、转录激活Gal4蛋白的基因序列、UAS序列和荧光蛋白序列；(2)提供荧光信号放大载体，包括步骤：在步骤(1)所述水体环境污染物响应载体的荧光蛋白序列之后克隆入转录激活因子TALE‑VP64编码序列，获得荧光信号放大载体；(3)将水体环境污染物响应载体和荧光信号放大载体与I‑SceI酶共同注射入鱼的受精卵，培养，获得监测水体环境污染物的转荧光蛋白基因鱼，所述鱼选自斑马鱼，所述水体环境污染物选自多环芳香烃类污染物，所述水体环境污染物响应元件选自多环芳香烃响应元件AhREs。
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