[发明专利]同时检测血液中维生素A和25-羟基维生素D的方法

摘要

本发明公开了一种同时检测血液中维生素A和25‑羟基维生素D的方法，包括以下步骤：(一)将全血样本离心，取上清液得血清或血浆，备用；(二)标准溶液的标定；(三)样品前处理；(四)取步骤(三)中处理后的待测上清液样品80μL放入自动进样瓶中经液相色谱串联质谱法进行分析，同时定量检测血液中维生素A和25‑羟基维生素D的含量。本发明所述的同时检测血液中维生素A和25‑羟基维生素D的方法，特异性强、准确度和灵敏度高、分析时间短。

主权项

1.一种同时检测血液中维生素A和25‑羟基维生素D的方法，其特征在于：包括如下步骤：(一)将全血样本离心，取上清液得血清或血浆，备用；(二)标准溶液的标定：三个以上浓度的标准品的混合标准工作液200ul分别和10ul混合内标工作液以涡旋混匀，制作标准曲线系列溶液；所述标准曲线系列溶液在检测前必须进行紫外分光光度计重新标定维生素A的准确浓度；所述标准品为视黄醇、25‑羟基维生素D2和25‑羟基维生素D3，所述混合内标工作液为维生素A同位素内标和25‑羟基维生素D同位素内标的混合液；(三)样品前处理：(1)精密移取步骤(二)中所述混合内标工作液加入到步骤(一)中所述血清或血浆中，涡旋混匀；(2)再加入纯水或甲酸水稀释后加入乙醇、甲醇或乙腈溶液，涡旋混匀后高速离心；(3)再加入正己烷萃取，涡旋混匀后离心；(4)然后取上清液后常温N2吹干；(5)加复溶液，涡旋混匀，超声，高速离心后取上清液样品待测；(四)取步骤(3)中处理后的待测上清液样品80μL放入自动进样瓶中经液相色谱串联质谱法进行分析，同时定量检测血液中维生素A和25‑羟基维生素D的含量；液相色谱条件：色谱柱：ZORBAX XDB C8 2.1*50mm 5μm；等度或梯度洗脱：流动相为甲醇和水，甲醇和水均含体积比为0.1％甲酸分析时间：4min；柱温：25℃；进样量：20μl；流速:0.35ml/min；串联质谱条件：采用电喷雾离子源ESI或大气压化学离子源APCI，正离子模式，选择反应监测模式，雾化气温度：350℃；雾化气气流：6L/min；雾化气压：35psi；毛细管电压：4500v；电压增量+:300；步骤(二)中25‑羟基维生素D包括25‑羟基维生素D2和25‑羟基维生素D3，所述视黄醇、25‑羟基维生素D2和25‑羟基维生素D3的同位素内标分别为[2H3]视黄醇、[2H3]25‑OH‑VD2和[2H6]25‑OH‑VD3。