[发明专利]一种华榛诱导丛生芽快繁方法

摘要

本发明涉及华榛诱导丛生芽快繁方法。主要技术要点是以华榛实生苗茎段和成熟种胚为外植体，接种于启动培养基MS+KT1.0mg·L‑1+IBA0.05mg·L‑1+GA31.0mg·L‑1+琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC0.1g·L‑1和MS+GA33.0mg·L‑1+琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC0.1g·L‑1配方上，定芽诱导率达到96.4％以上，再转接丛生芽诱导MS+KT1.5mg·L‑1+IBA0.05mg·L‑1+GA31.0mg·L‑1+胰蛋白胨0.1g·L‑1+琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC0.1g·L‑1上，萌芽率为92％。

主权项

一种华榛诱导丛生芽快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：茎段快繁体系的建立外植体选择：分别采集3月、4月、5月华榛播种出苗后7‑10d健壮实生小苗，去除根部，保留子叶并摘去其上部2片叶，自来水清洗植株表面灰尘，洗衣粉浸泡8min后自来水冲洗1h，放置超净工作台，用75%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒15min，无菌水清洗5‑6遍，切成2cm带芽茎段，置于无菌滤纸上吸干表面水分备用；茎段诱导萌发：将带芽茎段接种于启动培养基中，在温度26±1℃、湿度80±5%、光照14h/d、光照强度1800‑2000lx下培养，一周后定芽开始萌动，培养三周后节间抽长，每株有2‑3片新叶展开，叶色呈翠绿色，所述的启动培养基为MS+KT1.0mg·L‑1 +IBA0.05mg·L‑1 +GA31.0mg·L‑1 +琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC0.1g·L‑1；种胚快繁体系的建立外植体预处理：采集9‑10月份华榛成熟种子，将进行实验的华榛成熟种子提前7d处理，钳子去除外果皮、坚硬的内果皮，先进行80℃水中浸泡24h的热处理，再进行0℃冷藏室5d冷藏的冷处理，然后取出种子，放入GA35.0mg·L‑1浸泡1h；外植体采集：将预处理后的华榛种子用洗衣粉浸泡6min，自来水冲洗1h，放置超净工作台上；采用二次消毒法，先用75%酒精浸泡30s，0.1%升汞消毒8min，无菌水清洗5‑6遍，再去除内种皮，0.05%升汞消毒3min，无菌水清洗5‑6遍，置于无菌滤纸上吸干材料表面水分备用；启动培养：在超净工作台上将消毒好华榛种子，将胚乳切去1/2，保留含胚芽部分，接种于启动培养基上，在暗培养15d后，再在温度26±1℃、湿度80±5%、光照14h/d、光照强度1800‑2000lx下培养，7d后胚乳膨大、胚根长出、子叶展开，10‑20d，形成单芽且有2‑3片新叶展开，叶色呈翠绿色，所述的启动培养基为MS+GA3 3.0mg·L‑1+琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC 0.1g·L‑1；丛生芽诱导：将茎段和种胚诱导的单芽，切成3cm接至诱导培养基上，所述的诱导培养基为MS+KT1.5mg·L‑1+IBA0.05mg·L‑1+GA31.0mg·L‑1+胰蛋白胨0.1g·L‑1+琼脂5.8g·L‑1+蔗糖25g·L‑1+AC0.1g·L‑1，通过10d培养，定芽基部产生愈伤组织，连续培养20d后由胚性愈伤团逐步形成丛生芽，从而快速建立华榛诱导丛生芽快繁再生体系。