[发明专利]一种小立碗藓原生质体的制备方法

摘要

本发明公开了一种苔藓‑小立碗藓的原生质体的制备方法，包含下述步骤：原生质体的原材料‑原丝体与无菌超纯水机械打磨粉碎后，转移到10皿BCD培养基，控制pH值4.5，23℃，80μmol photons m^‑2s^‑1光强，16小时长日照下，培养5天后重复该过程一次，5天后显微镜检查细胞生长状况，收集20皿原丝体；新鲜配制20ml浓度0.7％溶解于8％甘露醇的崩溃酶，室温黑暗下溶解所收集的原丝体20分钟，1000rpm离心5分钟收集细胞，经过三次8％甘露醇洗涤后溶解于5ml甘露醇，显微计数一共约有9.6X10⁶个；转移到再生培养基培养3天后显微观察发现再生效率约为99％。与现有技术相比得到的再生原生质体增加了一倍。

主权项

小立碗藓原生质体的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：取小立碗藓孢子，经过两代植物组织快繁培养后，将小立碗藓原丝体与无菌超纯水混合后匀浆仪打磨粉碎得匀浆，匀浆转移到BCD培养基中，控制pH值6.5和4.5两个参数，在23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m‑2s^‑1的培养箱中连续继代培养5天，收集原丝体，采用崩溃酶酶解细胞壁20‑30分钟后纯化所得原生质体，显微检查细胞生长状况，进行显微观测计数、测量和统计，然后转移到再生培养基培养3天后显微观测统计再生效率。