[发明专利]一种从肿瘤细胞上清中分离微囊泡及其外泌体的方法有效
| 申请号： | 201610744198.3 | 申请日： | 2016-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN106289927B | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 程向东;吕航;徐志远 | 申请（专利权）人： | 浙江省中医院 |
| 主分类号： | G01N1/34 | 分类号： | G01N1/34;G01N1/30 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;李世玉 |
| 地址： | 310006 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从肿瘤细胞上清中分离微囊泡及其外泌体的方法，所述方法为：将肿瘤细胞贴壁培养后，取培养液离心，取上清液与偶联复合物混合，在4℃、100‑300rpm水平振荡条件下孵育3‑16h，去除液体，获得孵育后的偶联复合物并用PBS缓冲液清洗，获得吸附微囊泡的偶联微球；本发明采用的方法提取的总微囊泡，保留了全部微囊泡的结构和成分，产量高。并且可以进行二次分选，对特定的微囊泡进行分析，提高了提取效率和研究价值。总共的提取时间最少只要4小时，就可以完成微囊泡的提纯，最少5小时可以完成外泌体的提纯。而且提取的纯度更高，实验表明，提取的微囊泡占总提取蛋白的90％以上，而有机沉淀的比例不足20％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 细胞 上清中 分离 微囊泡 及其 外泌体 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从肿瘤细胞上清中分离微囊泡的方法，其特征在于所述方法为：将肿瘤细胞贴壁培养后，取培养液离心，取上清液与偶联复合物混合，在4℃、100‑300rpm水平振荡条件下孵育3‑16h，去除液体，获得孵育后的偶联复合物并用PBS缓冲液清洗，获得吸附微囊泡的偶联微球；所述偶联复合物是由偶联物与载体偶联制备而成，所述偶联物为亲脂性羰花青染料，所述载体为四氧化三铁磁微球、乳胶微球、聚苯乙烯微球、二氧化硅微球、琼脂糖颗粒、葡聚糖颗粒或胶体金颗粒。
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