[发明专利]一种用于载脂蛋白L1的酶联免疫检测及制备方法

摘要

本发明涉及一种酶联免疫及其检测方法，是一种新的抗人载脂蛋白L1的单抗包被酶标板及酶联免疫试剂盒的制备方法。其关键之处主要在于用基因工程方法制备特异性的鼠抗人载脂蛋白L1单抗，并将此抗体纯化后包被于酶标板上，做为试剂盒的一部分。试剂盒还包括载脂蛋白L1重组蛋白标准品、抗人载脂蛋白L1的多抗、辣根过氧化物酶标记的二抗、样本稀释液、抗体稀释液、显色液、终止液。试剂盒建立了快捷简便测定人血清和血浆中载脂蛋白L1浓度的测定方法。试剂盒主要用于供科学研究和动脉粥样硬化，肥胖，非洲锥虫病，慢性肾病等多种疾病的临床实验的研究使用。

主权项

人APOL1的单抗包被酶标板的制法，通过下列步骤制备而成：以BC017331 DNA为模板，PCR扩增APOL1 DNA片段（99nt‑815nt）基因片段，与载体PET28a连接，转化BL21，表达大量32 KD APOL1蛋白片段；将32 KD APOL1蛋白免疫小白鼠，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，选择阳性杂交瘤细胞于鼠腹水中培养，纯化蛋白得到抗APOL1的单抗；将所得单抗用pH9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释后包被96孔板，100μl/孔，4℃ 16‑24小时，PBST洗涤3次，每次30秒，然后除尽孔内液体；用含8% 小牛血清的pH7.4的PBS封闭，每孔200μl，37℃，2小时，PBST洗涤3次，干燥后密封；该板即为抗APOL1的单抗包被的酶标板，可用于APOL1的特异性检测。