[发明专利]一种高丹草叶斑病病原菌的分离鉴定方法

摘要

本发明公开一种高丹草叶斑病病原菌的分离鉴定方法，包括以下步骤：病原菌的分离、纯化；病原菌的接种和再分离；待病害症状稳定后，采集病样，再分离病原菌，获取与原分离物一致的分离物；病原菌的分子鉴定四个步骤。本发明通过准确鉴定高丹草叶斑病病原菌，技术人员结合不同栽培区域分离到病原菌种类及主要优势病原菌种群，来建立相应的防控方法。本发明采用高速匀浆机匀浆，能够使菌丝均匀断裂，使菌丝在菌悬液中菌丝分布均匀。

主权项

一种高丹草叶斑病病原菌的分离鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：病原菌的分离、纯化采用组织分离法选择典型病斑，剪取病健交接部，依次经第一酒精溶液表面消毒、次氯酸钠表面消毒、无菌水冲洗，采用无菌吸水纸吸干叶片表面水分，置于含链霉素的PDA平板上，恒温恒湿培养；待病斑组织长出菌丝、菌落扩展，挑取菌落尖端菌丝移至PDA平板上，恒温恒湿培养；病原菌的接种和再分离采集健康高丹草叶片，室内将要接种的叶片用第二酒精溶液表面消毒，机械损伤叶表；将步骤a）分离到的真菌采用液体培养收集菌丝，高速匀浆机匀浆，粉碎菌丝，稀释菌丝悬浮液，吸取菌丝悬浮液接种至新鲜高丹草叶片上，叶片保湿培养，观察接种点叶片变化情况，以不接种叶片保湿培养对对照；待病害症状稳定后，采集病样，再分离病原菌，获取与原分离物一致的分离物；病原菌的分子鉴定将步骤c）获取到的病原菌接种至铺有玻璃纸的PDA培养皿中，带菌落扩展至整个培养皿，用无菌药匙刮取菌丝，应用真菌DNA提取试剂盒提取DNA，以引物IT4/IT5 PCR扩增目的片段，对扩增产物进行测序获得产物序列；将获得序列与Genbank中已有序列进行比对，获得分离物种属信息。