[发明专利]基于荧光和比色方法检测癌细胞中H2O2纸芯片的制备

摘要

本发明公开了一种基于荧光和比色方法检测癌细胞内H2O2纸芯片的制备方法。利用Adobe illustrator CS4软件设计纸芯片的疏水蜡打印图案；利用蜡打印机打印纸芯片；利用激光切割机制备孔洞；将合成的荧光探针修饰在荧光工作区域，在捕获癌细胞后在刺激物作用下用于荧光检测癌细胞内H2O2的含量；在比色区域滴加显色剂溶液后将纸芯片折叠，从而进一步通过比色实现对癌细胞内H2O2的测定。

主权项

1.基于荧光和比色方法检测癌细胞中H2O2纸芯片的制备，其特征是包括以下步骤：1.1 在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计纸芯片的打印图案；1.2 将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，随后将打印过的A4色谱纸放置到平板加热器或烘箱中，在125 ºC下加热3 min，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；1.3 将步骤1.2中印有蜡打印图案的纸芯片通过激光切割机切割，制备孔洞；1.4 对步骤1.3中纸芯片的荧光工作区域进行功能化：取 50 μL 0.25 mg mL‑1的氧化石墨烯于室温下滴加到荧光工作区域反应30 min,用磷酸盐缓冲溶液洗去未连接上的石墨烯，随后滴加60μL 2 mmol mL‑1的伴刀豆球蛋白A反应20 min后用磷酸盐缓冲溶液清洗；然后滴加80μL合成好的荧光探针反应30 min 后用磷酸盐缓冲溶液清洗，随后用10.0 µL 1%的牛血清白蛋白掩蔽活性位点，随后将不同浓度的癌细胞置于荧光工作区域孵化1 h后用磷酸盐缓冲溶液冲洗，然后将功能化的荧光工作区域纸芯片放入荧光设备中，在360 nm的激发波长下进行荧光测定，绘制荧光强度与细胞浓度关系，实现对细胞内H2O2的精确检测；1.5 对步骤1.3中纸芯片的比色工作区域功能化：在比色层的工作区域分别滴加显色剂和pH为4~6的缓冲溶液；1.6 将步骤1.3中切割后所得的纸芯片在经过步骤1.4和步骤1.5的功能化处理后沿着折叠线折叠，折叠后α纸芯片上的荧光工作区域和比色工作区域与β纸芯片上的孔洞相对应，反应3 min 后进行比色测定绘制灰度与癌细胞浓度的标准曲线，进一步检测细胞内H2O2的含量。