[发明专利]一种堆肥水溶性有机物中腐殖化参数的调控方法

摘要

一种堆肥水溶性有机物中腐殖化参数的调控方法，主要步骤包括：(1)样品采集与水溶性有机物提取；(2)水溶性有机物紫外‑可见吸收光谱及三维荧光光谱测定，提取特征腐殖化参数；(3)细菌总DNA的提取，PCR扩增及变性梯度凝胶电泳DGGE，目的条带切胶测序；(4)利用典型对应分析，基于细菌群落结构与水溶性有机物腐殖化参数的相互关系，得到影响水溶性有机物腐殖化的关键微生物；(5)结合环境因子与关键微生物的相互关系，确定关键微生物的调控方法，从而达到通过调节环境因子来间接促进堆肥水溶性有机物腐殖化的目的。本发明分析简单，技术要求低，为促进堆肥的腐殖化提供了一种方便可行的分子生物学手段。

主权项

一种堆肥的水溶性有机物的腐殖化参数的调控方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：采集不同阶段堆肥样品，配制成水溶性有机物；步骤2：检测下列参数中的至少3个：(1)测定所述水溶性有机物在254nm下的紫外吸收值，将其除以水溶性有机物中的碳浓度，得单位浓度水溶性有机物的特征紫外吸收值SUVA254；(2)分别测定所述水溶性有机物在275nm到295nm与350nm到400nm的面积值，并计算其比值SR；(3)测定所述水溶性有机物在253nm和203nm下的紫外吸收值，计算其比值E253/E203；(4)扫描所述水溶性有机物在254nm激发波长下的荧光发射光谱，计算发射光谱中435‑480nm范围内的荧光积分面积与300‑345nm范围内的荧光积分面积的比值A4/A1；(5)扫描所述水溶性有机物在一定波长差下在250‑600nm范围内的同步荧光光谱，计算250‑308、308‑363、363‑600nm范围内各自荧光积分面积占总面积的比分比，分别记为PLR、FLR及HLR；步骤3：提取不同阶段样品中DNA，应用土壤DNA提取试剂盒进行不同阶段样品总基因组DNA的提取，并以该DNA为模板，选用细菌16SrDNA V3区特异基因扩增的引物进行PCR反应；将扩增产物进行变性梯度凝胶电泳，电泳结束后用SYBR GreenI染色30min，对DGGE图谱中的优势条带进行切胶回收，测序后在Genebank中比对结果；该SYBR GreenI的浓度为1∶10000；步骤4：将DGGE图谱中条带的相对丰度与所述水溶性有机物的腐殖化参数进行相关性分析，得到影响所述水溶性有机物腐殖化的关键微生物；步骤5：对环境因子与关键微生物进行RDA分析，根据微生物与环境因子的相互关系，确定关键微生物的调控方法，以达到通过调节环境因子间接促进堆肥水溶性有机物腐殖化的目的。