[发明专利]一种刺五加注射液的类过敏性检验方法

摘要

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种刺五加注射液的类过敏性检验方法。本发明提供的检验方法包括以下步骤：(1)、样品预处理；(2)、制备检测细胞；(3)、β‑氨基己糖苷酶释放率检测。与现有技术相比，本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法操作简单，检验耗时短；使得检验结果的评价和判定更加方便直观可靠；使用本发明提供的刺五加注射液的类过敏反应检验方法能够获得和实际小鼠实验相一致的较为准确的检验和判定结果；更加稳定可靠，对同一样品的多次检验结果无明显差别，重复性高。

主权项

1.一种刺五加注射液的类过敏性检验方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、样品预处理：将待检测的刺五加注射液于40‑60℃水浴10‑30min后，立即在6000‑10000rpm下离心30‑60s，取上清液，将上清液以无酚红无血清MEM培养基稀释10‑15倍，获得待检测液；(2)、制备检测细胞：于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养RBL‑2H3细胞，当RBL‑2H3细胞生长铺满90％的培养瓶底面积时，进行传代，传代比例为1:5‑1:8，隔天传代一次，获得正常生长的RBL‑2H3细胞，即为检测细胞；(3)、β‑氨基己糖苷酶释放率检测：取步骤(2)获得的检测细胞接种于24孔微孔培养板中，将接种后的微孔培养板于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养12‑24h后，使用PBS缓冲液洗涤细胞1次；向洗涤后的细胞中加入供试药品，于30‑37℃作用30‑40min后，将微孔培养板于4℃、2000‑4000rpm离心5‑10min，吸取上清液；将50μL上清液转移入96孔微孔培养板中，再加入β‑氨基己糖酶底物50μL/孔，于25‑37℃孵育20‑60min后；加入pH9‑10的Na₂CO₃‑NaHCO₃缓冲液或Tris‑HCl缓冲液100μL/孔后，于405nm处测定吸光度，计算β‑氨基己糖苷酶释放率。