[发明专利]一种检测人sST2蛋白的方法以及试剂盒有效
申请号: | 201610707725.3 | 申请日: | 2016-08-23 |
公开(公告)号: | CN107765014B | 公开(公告)日: | 2019-11-19 |
发明(设计)人: | 顾悦;赵丹;徐长银 | 申请(专利权)人: | 上海费玛生物科技有限公司;迪亚莱博(张家港)生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68 |
代理公司: | 31266 上海一平知识产权代理有限公司 | 代理人: | 崔佳佳;肖艳<国际申请>=<国际公布>= |
地址: | 201101 上海市闵*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明提供了一种用于检测人sST2蛋白的非诊断性双抗体夹心法,该方法具体步骤为:a)从人细胞株中提取ST2基因全长编码区,经双酶切后,克隆入pcDNA3.1载体中,构建真核表达载体pcDNA3.1‑ST2;b)将真核表达载体pcDNA3.1‑ST2转入酿酒酵母中进行表达,并纯化获得重组人sST2蛋白;c)使用重组人sST2蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体并纯化,获得鼠抗人sST2单抗;d)重组人sST2蛋白免疫兔制备兔血清,并纯化获得兔抗人sST2多抗;e)在固相载体上包被鼠抗sST2单抗,使用生物放大系统标记的兔抗人sST2多抗作为二抗;f)建立双抗体夹心检测sST2的方法。 | ||
搜索关键词: | 一种 检测 sst2 蛋白 方法 以及 试剂盒 | ||
【主权项】:
1.一种用于检测人sST2蛋白的非诊断性双抗体夹心法,其特征在于,该方法具体为:/n步骤1)从人细胞株中提取ST2基因全长编码区,经双酶切后,克隆入pcDNA3.1载体中,构建真核表达载体pcDNA3.1-ST2;/n步骤2)将真核表达载体pcDNA3.1-ST2转入酿酒酵母中进行表达,并纯化获得重组人sST2蛋白;/n步骤3)重组人sST2蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体并纯化,获得鼠抗人sST2单抗;/n步骤4)重组人sST2蛋白免疫兔制备兔血清,并纯化获得兔抗人sST2多抗;/n步骤5)在固相载体上包被鼠抗sST2单抗,使用生物放大系统标记的兔抗人sST2多抗作为二抗;/n步骤6)建立双抗体夹心检测sST2的方法;/n所述的步骤3)中用于免疫小鼠的蛋白为重组人sST2蛋白与重组人sST2经过胰蛋白酶水解产物的混合物,所述的步骤5)所述的鼠抗sST2单抗为多株鼠抗sST2单抗混合物。/n
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