[发明专利]一种基于亲水作用色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法

摘要

一种基于亲水作用色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于：尿液样品经离心、稀释后直接引入亲水作用色谱飞行时间质谱仪进行测定，经过峰对齐、校正和标准化、多变量统计分析和谱库检索可以找到喉癌志愿者和健康志愿者尿液中的差异代谢物。本发明为全新的尿液中差异代谢物的鉴定方法，是反相色谱飞行时间质谱差异代谢物研究方法的有效补充。

主权项

1.一种基于亲水作用色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于，是以喉癌志愿者和健康志愿者尿液为样本进行测定、比较、筛选，具体包括以下工艺步骤：a、尿液在室温下解冻，然后在4 ºC以10000 g的速度离心10 min以去除颗粒物；b、用移液枪移取100 µL的尿液样本，并加入200 µL的纯水，混合均匀，然后装入色谱瓶中待测；c、亲水作用色谱飞行时间质谱对所有尿液样本进行逐一分析，得原始数据；亲水作用色谱条件：采用phenomenex公司生产的Luna 3 µm HILIC 200 A规格150 × 4.6 mm的柱子进行分离分析，柱子温度为40 ºC，流动相A为5%的乙腈和95%的乙酸胺水溶液，其中最终乙酸胺的浓度为10 mmol/L，流动相B为95%的乙腈和5%的乙酸胺水溶液，其中最终乙酸胺的浓度为10 mmol/L，流动相流速为450 μL/min，梯度洗脱条件为：0‑15 min，99%B‑60%B；15‑15.5 min，60%B‑60%B；15.5‑16 min，60%B‑99%B；并维持5 min；总分析时间为21 min，进样量为5 μL；飞行时间质谱检测器的条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；ESI+模式下：喷雾电压为3500 V，干燥气为4 L/min，180℃，雾化气为0.04 MPa，碰撞能量为7 eV，传输时间为100 µs；d、将原始数据转换为mzXML的格式后，对数据进行峰对齐、校正、滤噪后，采用SIMCA‑P多元数据分析软件进行多变量统计分析，筛选VIP大于1的代谢物；e、用SPSS进行T检验，对于P<0.05且VIP大于1的为潜在差异代谢物；f、对于潜在差异代谢物，采用谱库检索或者标准品比对方法进行验证，即为差异代谢物。