[发明专利]一种近红外荧光染料及其合成方法和用于寄生虫荧光标记

摘要

本发明属于寄生虫病的生物光学标记领域，主要为一种近红外荧光染料的合成，并将其应用于血吸虫成虫荧光标记。一种近红外荧光染料，具有共轭二烯键结构，更具体的是分子结构通过三个烯键链接，亲水基团具有磺酸基(‑SO3H)和羧基(‑COOH)；并且这种近红外荧光染料可以用于血吸虫成虫荧光标记成像。实现了近红外荧光染料的设计、合成以及荧光标记血吸虫成虫。近红外荧光染料通过共轭体系使荧光染料发射光位于近红外区域，再结合亲水性的磺酸基和羧基进行水溶性改性，该类近红外荧光染料用于荧光标记血吸虫成虫，有效地解决了血吸虫成虫荧光成像中荧光染色效果差、背景荧光干扰和光穿透性差的问题。

主权项

一种具有下式结构的近红外荧光染料的应用，其特征在于：该近红外荧光染料可以用于血吸虫成虫荧光标记成像；荧光标记方法包括如下步骤：(1)获取血吸虫尾蚴：尾蚴从感染毛蚴的阳性的钉螺得到，取阳性螺放入清水中，在白炽灯下光照2小时逸出新鲜尾蚴；(2)小鼠感染：将六周龄雌性小鼠剪去小鼠腹部体毛，取温水湿润小鼠腹部皮肤，并将含有50条尾蚴的盖玻片贴于小鼠去毛的腹部皮肤上，保持20分钟使尾蚴穿透小鼠皮肤进行感染；(3)获取血吸虫成虫：将感染后的小鼠饲养6周后，使其颈部脱臼致死，严格按照无菌操作要求，依次剖开腹部皮肤、腹膜，采取灌注法于肝门‑肠系膜静脉中收集成虫；将收集到的成虫在生理盐水中漂洗3次后分配到培养皿中，加入RPMI‑1640细胞培养液培养2小时后，镜检筛选活性良好的虫体用于荧光成像；(4)血吸虫成虫荧光成像：荧光染料用二甲基亚砜溶解准确配制成1mmol的母液，然后再用PBS缓冲液稀释成5μM的稀释液；移取200μL稀释液加入到培养皿中，用镊子挑取成虫加入到荧光染料稀释液中，于室温孵育5分钟至6小时后，将成虫转移到荧光成像器皿，在635nm激发下共聚焦荧光显微镜观察成虫的荧光标记情况，采集650‑750nm的荧光信号进行荧光成像。