[发明专利]一种酶法制备三磷酸腺苷的方法

摘要

本发明公开了一种酶法制备三磷酸腺苷的方法，包括步骤：1)制备ATP生产酶：通过基因工程改造、发酵、纯化或直接提取方式获得ATP生产酶；2)反应液中ATP的制备：添加腺苷、ATP生产酶及多聚磷酸或其盐进行ATP制备；3)分离产物和ATP生产酶：固定化的ATP生产酶在反应罐中直接分离；游离的ATP生产酶通过滤器中超滤膜分离；4)成品制备：分离出酶的反应液通过离子交换层析、浓缩、结晶、干燥等步骤制备成品ATP。本发明采用新型ATP生产酶，生产过程简单易控；使用腺苷作为底物，降低了成本；建立ATP生产酶回收体系，适用于工业生产；酶法制备反应液中杂蛋白、色素等杂质含量少，易于后续纯化。

主权项

1.一种酶法制备三磷酸腺苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)在反应罐中合成ATP的反应：在反应罐中，100L无菌水的反应体系为含有底物2.5kg腺苷，以及0.1kg ATP、0.5kg磷酸二氢钠、0.3kg氯化钠、0.3kg硫酸铵、1.0kg六水氯化镁和2.0kg六偏磷酸钠的溶液，配制时均匀搅拌防止出现沉淀；调节pH值至7.5，在反应体系中添加500U/L AK酶、800U/L Ppk2酶及800U/L Pap酶开始反应；反应期间控制pH值为7.5，温度为45℃，反应6小时；(2)在过滤器中分离ATP生产酶：通过超滤方法，将步骤(1)中反应体系的反应液通过过滤器分离AK、Ppk2及Pap三种ATP生产酶；过滤，滤出液为分离出酶之后的反应液，含有ATP、少量ADP、少量AMP及盐离子；回收的AK、Ppk2及Pap酶，添加相应新酶后再次用于步骤(1)反应；(3)分离产物ATP：步骤(2)的滤出液通过离子交换层析、浓缩、结晶、干燥后制得成品ATP。