[发明专利]一种快速获得和纯化人脐带间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及快速获得和纯化人脐带间充质干细胞的方法，包括如下步骤：1)在无菌条件下，收集人类新生儿脐带组织，用无菌PBS液冲洗，去除血污，将脐带中的血管组织通过机械分离法去除，得到华通氏胶块；2)将步骤1)中获得的华通氏胶块用无菌剪制成小块，并用细胞培养液重悬后，接种于培养皿中，然后在培养箱中孵育，得到贴壁细胞；3)将步骤2)培养皿中的培养液及悬浮细胞弃去，用复合胶原酶差速消化，将贴壁细胞消化下来，加入PBS清洗、重悬后得到细胞悬液：P1代hUMSCs。本发明的有益效果是：全过程采用不含有抗生素的液体进行操作，避免抗生素对细胞的毒性影响hUMSCs的增殖活力。

主权项

一种快速获得和纯化人脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在无菌条件下，收集人类新生儿脐带组织，用无菌PBS液冲洗，去除血污，将脐带中的血管组织通过机械分离法去除，得到华通氏胶块；2)将步骤1)中获得的华通氏胶块用无菌剪制成小块，并用细胞培养液重悬后，接种于培养皿中，然后在培养箱中孵育，得到贴壁细胞；3)将步骤2)培养皿中的培养液及悬浮细胞弃去，用复合胶原酶差速消化，将贴壁细胞消化下来，加入PBS清洗、重悬后得到细胞悬液：P1代hUMSCs；4)将步骤3)得到的P1代hUMSCs用滤网过滤，去除华通氏胶块，收集过滤细胞液，离心后弃上清，再用无血清DMEM液清洗2次，用流式细胞仪进行细胞筛选；5)将步骤4)中流式细胞仪筛选后得到的细胞再次用培养液重悬后，接种于培养皿中，然后在培养箱中孵育，得到贴壁细胞；6)将步骤5)培养皿中再次用复合胶原酶差速消化，将贴壁细胞消化下来，得到的细胞悬液进行流式细胞仪鉴定，即可得到高纯度的P2代hUMSCs。