[发明专利]一种植物干花或干叶中金丝桃苷含量的测定方法

摘要

本发明提供一套超高效液相色谱‑电喷雾串联质谱仪对植物干花或干叶中金丝桃苷的含量进行分离测定，灵敏度高、准确性好、样品前处理简捷、省时省力。该方法的建立对植物干花或干叶中黄酮类化合物的分离鉴定及中药材质质量控制具有一定的指导意义。 1

主权项

1.一种植物干花或干叶中金丝桃苷含量的测定方法，其特征在于：包括下列步骤：

a.将罗布麻、黄蜀葵、金花葵中的任意一种或几种烘干或晒干，制成干叶或干花，碾成粉末后过40目筛；

b.分别准确称取植物干叶或干花粉末两份平行试料各1.00 g，加入10 mL乙腈和水体积比为80:20的乙腈水溶液于50 mL离心管中，35KHZ超声提取 30分钟，10000 r/min离心5 min，上清液转入另一个50 mL离心管中，残渣再加入10 mL乙腈和水体积比为80:20的乙腈水溶液，重复提取一次，合并上清液，提取液于60℃下氮气吹干，用10%甲醇水溶液定容至1.00 mL，经0.22 nm孔径滤膜过滤后，供超高效液相色谱‑电喷雾串联质谱仪测定，其中所述甲醇水溶液中甲醇和水体积比为10:90；

c.测定

（1）液相色谱条件

色谱柱：Eclipse Plus C18超高压快速高分离度色谱柱，填料粒径为1.8μm，规格为2.1×100mm

流动相：A：纯水，B甲醇

流速：0.25 mL/min

洗脱梯度：0‑0.5 min保持10%B,0.5‑5 min 10%B线性变化至90%B，5‑5.8 min保持90%B，5.8‑6 min 90%B线性变化至10%B，6‑8 min保持10%B；

进样量：5 μL

（2）质谱条件

电离模式：电喷雾电离正离子模式；

检测方式：多反应监测；

毛细管电压：3 000 V；离子源温度：300 ℃；

干燥气温度：300 ℃；干燥气流量：4 L/min；

雾化气压力：40 psi；鞘气温度：350 ℃；鞘气流量：11 L/min；

d.数据分析和处理。

2.如权利要求1所述的一种植物干花或干叶中金丝桃苷含量的测定方法，其特征在于：所述数据分析和处理方法如下：

试样中金丝桃苷残留量以质量分数X计，数值以微克每千克表示，单点校正按式(1)、(2)计算：

                     (1)

                       (2)

式中：

C_i—试样溶液中金丝桃苷浓度，单位为µg/L；

C_s—对照溶液中金丝桃苷浓度，单位为µg/L；

A_i—试样溶液中金丝桃苷峰面积；

A_s—对照溶液中金丝桃苷峰面积；

X—试样中金丝桃苷的含量，单位为μg/kg；

V—样液最终定容体积，单位为mL；

m—试样质量，单位为g；

标准曲线校准按式(3)计算：

                   (3)

C_i —标准曲线上查得的试样中金丝桃苷浓度，单位为µg/L；

V—样液最终定容体积，单位为mL；

m—试样质量，单位为克；

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字；

在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于两个测定值的算术平均值的20 %。