[发明专利]一种毕赤酵母表达重组蛋白的发酵工艺有效
| 申请号： | 201610587122.4 | 申请日： | 2016-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN106191181B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 杨树林;赵健烽;黄建民;高力虎;杜尔凤;陶海;冯丽萍;季乐;周爱梅 | 申请（专利权）人： | 江苏江山聚源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/78;C07K1/34;C12R1/84 |
| 代理公司： | 32203 南京理工大学专利中心 | 代理人： | 刘海霞;朱显国 |
| 地址： | 214500 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种毕赤酵母表达重组蛋白的发酵工艺，采用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris为菌种，先进行一级种子培养，至菌浓为20±2g/L时转接二级种子培养，二级种子培养至菌浓为120±10g/L时转接至甘油培养阶段，甘油培养阶段中甘油的添加量为60～70g/L，待溶氧迅速上升到达相对稳定状态时，进入甲醇诱导阶段，诱导120±8h后，发酵结束。本发明减少了原有工艺中的甘油流加阶段，甘油消耗完即进入下一阶段，不再需要准备流加用无菌甘油，精简了甘油灭菌罐，减少了能源、资源的损耗以及甘油的浪费；同时无需再监控菌体浓度，降低了出错几率，减少因技术失误而导致的发酵失败，更适合大规模工业化生产，为重组蛋白的工业化生产带来便利和极大的经济价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 表达 重组 蛋白 发酵 工艺 | ||
【主权项】：
1.一种毕赤酵母表达重组蛋白的发酵方法，其由如下步骤组成：/n采用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris为菌种，先进行一级种子培养，至菌浓为20±2g/L时转接二级种子培养，二级种子培养至菌浓为120±10g/L时转接至甘油培养阶段，甘油培养阶段中甘油的添加量为60～70g/L，待溶氧迅速上升到达相对稳定状态时，进入甲醇诱导阶段，诱导120±8h后，发酵结束，/n其中，所述的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris，保藏编号为CGMCC No.5021；/n所述的一级种子培养为将菌种巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris接种至种子培养基中，30℃摇瓶培养24h～36h，至菌体湿重达到20±2g/L；/n所述的二级种子培养为将一级种子液全部转接入发酵培养基中，30℃培养，用氨水调节并控制pH值为5.0，溶氧控制在20％～30％，培养至菌体湿重达到120±10g/L；/n所述的甘油培养阶段为将二级种子液转入发酵培养基中，添加60～70g/L的甘油，30℃培养，用氨水调节并控制pH值为5.0，通气量为30m
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