[发明专利]食品中亚硝胺的HPLC检测方法

摘要

本发明公开了一种食品中亚硝胺的HPLC检测方法，步骤是：将食品中亚硝胺先脱去亚硝基，然后进行荧光标记，荧光标记后进行分散液液微萃取，所得溶液用高效液相‑荧光检测法进行检测。本发明方法快速、灵敏，能够一次性检测四种亚硝胺（N,N‑二乙基亚硝胺，N,N‑二丙基亚硝胺，N,N‑二丁基亚硝胺，吡咯烷亚硝胺），具有快速性，简洁性，环保性，高灵敏性、杰出选择性等优点，可以用于酱牛肉，泡菜，啤酒，咸鸭蛋，马步鱼、香肠等食品中亚硝胺的检测，在最佳条件下，获得的亚硝胺检测限的范围是0.80‑1.60 ng L‑1，明显低于现有报道过的方法，在食品安全分析方面展现出了远大前景。

主权项

1.一种食品中亚硝胺的HPLC检测方法，其特征是包括以下步骤：（1）将食品用二氯甲烷萃取，萃取液过滤、回收二氯甲烷，剩余物用甲醇溶解，得亚硝胺溶液；（2）将步骤（1）的亚硝胺溶液进行脱亚硝基处理，得脱亚硝基的溶液；（3）将脱亚硝基的溶液用荧光试剂2‑(11H‑苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯进行荧光标记，得荧光标记的溶液；（4）向荧光标记的溶液中加入水，然后加入萃取剂与分散剂的混合液，超声萃取后离心分离，取底层液体，得待测样品溶液；（5）将待测样品溶液加入高相液相色谱仪，用荧光检测器检测；步骤（3）中，荧光标记的步骤为：将脱亚硝基的溶液、pH9‑10的缓冲液、乙腈、水和浓度1.0×10‑3 mol L‑1的BCEC‑Cl乙腈溶液按体积比10:80：140:700:70混合，在45‑55℃下反应10‑20min，反应后冷却至室温，加乙酸调节pH至酸性，得荧光标记的溶液；步骤（4）中，荧光标记的溶液、水、萃取剂和分散剂的体积比为1000:6000:95:1490；步骤（4）中，所述萃取剂为氯仿；所述分散剂为乙腈；步骤（5）中，所用色谱柱为反相ZORBAX SB‑C18色谱柱，流动相A为体积分数5%的乙腈水溶液，流动相B为纯乙腈，洗脱程序为：0‑20 min，流动相B 75‑85%；20‑25min，流动相B 85‑100%；荧光检测器的激发波长为279 nm，发射波长为380 nm；所述亚硝胺为N,N‑二乙基亚硝胺、N,N‑二丙基亚硝胺、N,N‑二丁基亚硝胺或吡咯烷亚硝胺。