[发明专利]一种生物转化联产D-赖氨酸和5-氨基戊酸的方法

摘要

一种生物转化联产D‑赖氨酸和5‑氨基戊酸的方法将L‑赖氨酸溶解，加入赖氨酸消旋酶全细胞，反应结束后去除赖氨酸消旋酶全细胞，得到D‑赖氨酸和L‑赖氨酸的混合水溶液，再加入表达L‑赖氨酸单加氧酶和5‑氨基酰胺水解酶的基因工程菌全细胞拆分DL‑赖氨酸，得到D‑赖氨酸和5‑氨基戊酸。本发明原料易得，生产成本低工艺简单，反应条件温和，D‑赖氨酸的高学纯度高达98%以上；而且L‑赖氨酸也转化为更有价值的5‑氨基戊酸，原料得到充分利用。

主权项

1.一种生物转化联产D‑赖氨酸和5‑氨基戊酸的方法，其特征在于：其生产方法包括以下步骤：步骤一，构建表达赖氨酸消旋酶的基因工程菌、表达L‑赖氨酸单加氧酶和5‑氨基酰胺水解酶的基因工程菌；所述表达赖氨酸消旋酶的基因工程菌的构建方法为：将NCBI登录号为WP_004243720.1的Proteus mirabilis BCRC10725来源赖氨酸消旋酶lyr的氨基酸序列进行密码子优化后，全基因合成该序列，两端设计酶切位点NcoI和XhoI，亚克隆到载体pET28a上，获得重组质粒pET28a‑lyr；将构建好的重组质粒pET28a‑lyr用氯化钙法转化进入大肠杆菌表达宿主BL21（DE3），得到赖氨酸消旋酶表达菌种BL21（DE3）/pET28a‑lyr；所述表达L‑赖氨酸单加氧酶和5‑氨基酰胺水解酶的基因工程菌的构建方法是：将davA片段与表达载体pET‑22b相连，将davB片段与表达载体pRSF‑dute相连，分别得到重组质粒pET‑22b‑DavA和pRSF‑davB，将重组质粒pET‑22b‑DavA和pRSF‑davB导入E.coli BL21的感受态细胞中，得到过表达了davBA的重组菌BL‑22A‑RB；将davB片段与表达载体pACYC‑dute相连，得到重组质粒pACYC‑davB，将重组质粒pACYC‑davB导入重组菌BL‑22A‑RB的感受态细胞中，得到重组菌株E.coli BL‑22A‑RB‑YB；步骤二，培养步骤一构建的基因工程菌；步骤三，以L‑赖氨酸为原料，利用步骤二培养的基因工程菌转化生产D‑赖氨酸和5‑氨基戊酸。