[发明专利]一种金银花质量评价方法

摘要

本发明公开了一种金银花质量评价方法，该方法对金银花中绿原酸、木犀草苷和6种环烯醚萜苷类成分进行测定，其中，所述6种环烯醚萜苷类成分是马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛。本发明首次将金银花中的环烯醚萜苷类成分纳入金银花质量评价体系，为保障质量评价方法的可靠性和有效性，同时选取6种金银花中的代表性环烯醚萜苷类成分进行测定，并首次建立了分散固相萃取‑高效液相色谱(DSPE‑HPLC)法检测这6种不同结构环烯醚萜苷类成分，显著提高了对金银花质量评价的可靠性和有效性，从而进一步提高了金银花药材及相关成药质量控制水平，对于指导临床应用具有重要意义。

主权项

1.一种金银花检测方法，其特征在于，所述方法对金银花中绿原酸、木犀草苷和6种环烯醚萜苷类成分进行测定，其中，对绿原酸成分测定方法按照2015版《中国药典》测定方法进行，具体方法为：绿原酸照通则0512高效液相色谱法进行测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑0.4％磷酸溶液为流动相；检测波长为327nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000；乙腈与0.4％磷酸溶液体积比为13：87；对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得，对照品溶液在10℃以下保存；供试品溶液的制备：取过四号筛的本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；其中，超声功率250W，频率35kHz；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；对木犀草苷成分测定方法按照2015版《中国药典》测定方法进行，具体方法为：木犀草苷照照通则0512高效液相色谱法进行测定；色谱条件与系统适用性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂，具体型号为Agilent ZORBAX SB‑phenyl 4.6mm×250mm，5μm，以乙腈为流动相A，以0.5％冰醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：0～15分钟，流动相A 10％→20％，流动相B 90％→80％；15～30分钟，流动相A 20％，流动相B 80％；30～40分钟，流动相A 20％→30％；流动相B 80％→70％，检测波长为350nm，理论板数按木犀草苷峰计算应不低于20000；对照品溶液的制备：取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每lml含40μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取过四号筛的本品细粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，回收溶剂至干，残渣用70％乙醇溶解，转移至5ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，即得；其中，超声功率250W，频率35kHz；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；所述6种环烯醚萜苷类成分是马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛，对6种环烯醚萜苷类成分测定步骤如下：(1)将金银花粉碎，过筛，称取一定量金银花粉待用；(2)向步骤(1)中的金银花中加入提取溶剂，摇匀后进行超声提取得上清液；(3)向步骤(2)中的上清液中加入净化剂，涡流振荡；(4)经步骤(3)处理后的上清液用微孔滤膜过滤得提取液；(5)分别精密称取马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、开联番木鳖苷二甲基乙缩醛对照品，加甲醇溶解，制混合标准溶液；使用时，逐级稀释，待用；(6)将步骤(4)得到的提取液进行高效液相色谱分析，色谱条件如下：色谱柱：Kromasil C18，4.6×250mm，5μm；流速：0.8mL/min；检测波长：240nm；柱温：25‑30℃；流动相：0.4％甲酸水溶液‑乙腈，梯度洗脱程序如下：0～15min，10％～14％乙腈；15～35min，14％～25％乙腈；35～45min，25％～50％乙腈；45～50min，50％～100％乙腈；50～65min，100％乙腈；(7)以外标法进行金银花中六种环烯醚萜苷类成分的定量分析，即以已知浓度的环烯醚萜苷类的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对提取液进行测定，测得检出提取液中六种环烯醚萜苷类成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得样品中马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛的含量。