[发明专利]一种寡雄腐霉原生质体的制备和再生方法与复合酶解液有效
| 申请号： | 201610542589.7 | 申请日： | 2016-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN106119132B | 公开（公告）日： | 2017-11-21 |
| 发明（设计）人： | 周剑平;王沛雅;祝英;王治业;彭轶楠;巩晓芳;杨晖 | 申请（专利权）人： | 周剑平;王治业;王沛雅 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/06;C12R1/645 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730000 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种寡雄腐霉原生质体的制备和再生方法，包括如下步骤a.菌丝孢子混合体制备；b.原生质体制备；c.原生质体纯化；d.原生质体再生。本发明采用含有lysing enzyme、cellulase、lyticase的复合酶系对寡雄腐霉的菌丝体进行酶解而得到寡雄腐霉原生质体，此原生质体通过以甘露醇为渗透压稳定剂的再生培养基液体振荡培养的途径再生。本发明所述方法制备的寡雄腐霉原生质体数量较多，产量较高，活性好；通过液体培养再生途径可获得较高再生率，可达1.25%。此方法操作简便，稳定性好，获得的寡雄腐霉原生质体完全能够满足后期基因遗传转化、细胞融合培养等研究应用。本发明还提供一种制备寡雄腐霉原生质体的复合酶解液，是寡雄腐霉原生质体制备过程的关键因素，该酶解液适合进一步的开发应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 寡雄腐霉 原生 质体 制备 再生 方法 复合 酶解液 | ||
【主权项】：
一种寡雄腐霉原生质体的制备和再生方法，其特征是包括如下步骤：a. 菌丝体制备：将培养在平板上的寡雄腐霉菌丝孢子混合体刮下来，用渗透压稳定剂洗涤，离心收集菌丝孢子混合体；b. 原生质体制备：向每1g收集到的菌丝孢子混合体中加入2～6mL 1% lysing enzyme，2～6mL 1% cellulase和50～300 U lyticase复合酶解液进行酶解，获得寡雄腐霉原生质体；c. 原生质体纯化：过滤除去上述获得的原生质体与菌丝孢子的混合物，离心收集纯化后的寡雄腐霉原生质体；d. 原生质体再生：用渗透压稳定剂洗涤重悬原生质体，在液体再生培养基中振荡培养。
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