[发明专利]一种高效生产重组禽腺联病毒的方法在审
| 申请号： | 201610514164.5 | 申请日： | 2016-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN106085972A | 公开（公告）日： | 2016-11-09 |
| 发明（设计）人： | 王安平;朱善元;王永娟;左伟勇;吴双;郭长明;秦枫;洪伟鸣 | 申请（专利权）人： | 王安平;朱善元 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/866 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效生产重组禽腺联病毒的方法,该方法是首先分别构建获得表达AAAV功能蛋白基因Rep78、Rep52的重组杆状病毒rBacRep、表达AAAV 3种结构蛋白基因VP1、VP2、VP3的重组杆状病毒rBacVP、表达绿色荧光蛋白报告基因的重组杆状病毒rBacGFP；然后将rBacRep、rBacVP、rBacGFP同时感染昆虫细胞Sf9，制得rAAAV‑GFP。荧光定量PCR检测每个Sf9细胞可产生rAAAV‑GFP约28000VG，比传统三质粒法提高了约20倍。本发明不仅操作程序简便，病毒滴度大大提高，而且易进行大规模生产，克服了rAAAV作为新型病毒基因转移载体使用的瓶颈。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 生产 重组 禽腺联 病毒 方法 | ||
【主权项】：
一种高效生产重组禽腺联病毒方法，其特征包括以下步骤：(1)含AAAV功能蛋白基因Rep78、Rep52双表达重组质粒pFB‑Rep的构建及重组杆状病毒rBacRep的制备；(2)含AAAV 3种结构蛋白基因VP1、VP2、VP3重组质粒pFB‑VP的构建及重组杆状病毒rBacVP的制备；(3)含巨细胞CMV启动子调控的绿色荧光蛋白报告基因转移载体pFB‑ITRGFP的构建及重组杆状病毒rBacGFP的制备；(4)三种杆状病毒rBacRep、rBacVP、rBacGFP的扩增；(5)昆虫细胞Sf9的悬浮培养；(6)三种杆状病毒rBacRep、rBacVP、rBacGFP共感染Sf9细胞，收获rAAAV‑GFP；(7)rAAAV‑GFP的纯化。
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