[发明专利]一种快速定量检测肌钙蛋白和肌酸激酶同工酶的试剂盒

摘要

本发明属于试剂盒领域，具体涉及一种快速定量检测肌钙蛋白和肌酸激酶同工酶的试剂盒及其制备方法，包括底板，所述底板上设有依次搭接的样品垫、抗体结合垫I、抗体结合垫Ⅱ、包被分析膜以及吸水垫，其中所述抗体结合垫I包被有与被生物素标记的抗肌钙蛋白I单克隆抗体偶联的免疫磁珠I，所述抗体结合垫Ⅱ包被有与抗肌酸激酶同工酶单克隆抗体偶联的免疫磁珠Ⅱ，所述磁珠I的表面包被有链霉亲和素。本发明试剂盒具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测等优点，适于大范围推广应用。

主权项

一种快速定量检测肌钙蛋白和肌酸激酶同工酶的试剂盒，其特征在于，包括底板，所述底板上设有依次搭接的样品垫、抗体结合垫I、抗体结合垫Ⅱ、包被有两条检测线和一条质控线的包被分析膜以及吸水垫，其中所述抗体结合垫I包被有与被生物素标记的抗肌钙蛋白I单克隆抗体偶联的免疫磁珠I，所述抗体结合垫Ⅱ包被有与抗肌酸激酶同工酶单克隆抗体偶联的免疫磁珠Ⅱ，所述免疫磁珠I的表面包被有链霉亲和素，所述两条检测线为包被肌钙蛋白I单克隆抗体的检测线I以及包被肌酸激酶同工酶单克隆抗体的检测线Ⅱ，所述质控线固定有抗鼠IgG抗体；所述抗体结合垫I由以下步骤制得：A)结合垫I的预处理：将玻璃纤维素膜或聚酯膜放入预处理液中浸泡3～6h，于35～39℃真空干燥35～40min，即得；其中所述预处理液为含有1.5～3％牛血清白蛋白、0.01～0.05％氯化钠、0.01～0.03％氯化钙、0.1～1％海藻糖和0.1～0.5％Tween‑80的pH为7.5～8.1的Tris‑HCl缓冲液；B)免疫磁珠I的制备：生物素标记的抗肌钙蛋白I单克隆抗体的制备：将生物素与抗cTnI单克隆抗体按32～35:1的摩尔比混合，26～28℃反应0.6～1.0h后置于透析液I中3～7℃透析过夜，即得；磁珠的洗涤：将100ml浓度为6～8㎎/ml的磁珠置于磁分离器中，磁吸3～6min，去上清液；用100ml磁珠洗涤液洗涤磁珠1～2次，将洗涤完毕后的磁珠置于2～8℃保存，备用；其中所述磁珠洗涤液为含有1.0～2.0％牛血清白蛋白和0.1～0.3％聚乙二醇的pH为7.8～8.2的Tris‑HCl缓冲液；偶联：往上述洗涤后的磁珠加入偶联缓冲液，再加入上述所得生物素标记的抗cTnI单克隆抗体，25～28℃反应2～3h，2～8℃保存，即得免疫磁珠I；其中所述偶联缓冲液为含有0.01～0.04％Tween‑20、0.1～0.3％海藻糖、0.5～1.0％牛血清白蛋白、0.01～0.05％氯化钠和0.01～0.03％氯化钙的pH为8.8～9.0的Tris‑HCl缓冲液，所述磁珠在所述偶联缓冲液中的含量为0.4～0.6㎎/ml，所述生物素标记的抗肌钙蛋白I单克隆抗体在所述偶联缓冲液中的含量为2～6μg/ml；C)将上述所得免疫磁珠I用工作液I稀释至浓度为200～300μg/ml，均匀喷涂于上述经预处理后的结合垫I上，于35～39℃真空干燥2～4h，即得抗体结合垫I；其中，所述生物素为N‑羟基琥珀酰亚胺生物素，所述透析液I为含有5～12％菊糖的pH为7.0～7.5的PBS缓冲液；所述工作液I为含有5～12％菊糖、2～5％二硫代苏糖醇、0.05～0.1％链霉素以及0.5～1％EDTA‑2Na的pH为7.2～7.4的Tris‑HCl缓冲液。