[发明专利]地乌药材HPLC‑UV特征图谱构建方法

摘要

本发明公开了一种地乌药材高效液相色谱(HPLC)特征图谱建立方法，属于中药分析检测领域，以解决地乌药材质量控制的问题。所述方法包括以下步骤(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)色谱条件的建立；(4)特征图谱的构建。本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点，可较全面检测地乌药材中多种主要有效成分，从而构建地乌药材HPLC‑UV特征图谱。

主权项

地乌药材HPLC‑UV特征图谱构建方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的anhuienoside E、glycoside St‑14a、hemsgiganoside B、flaccidoside Ⅱ、hederasaponin B对照品适量，加30％乙腈制成浓度为0.2～0.5mg·mL‑1的混合对照品溶液，滤过，即得；所述anhuienoside E、glycoside St‑14a、hemsgiganoside B、flaccidoside Ⅱ、hederasaponin B的中文名称为安徽银莲花皂苷E、St‑14a糖、常春藤皂苷B、地乌皂苷W3、3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖醛酸齐墩果酸28‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖‑(1→6)‑β‑D‑吡喃葡萄糖酯；(2)供试品溶液的制备取地乌药材样品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50～100％甲醇，称重，超声提取，放冷，补足减失的重量，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即得；(3)HPLC‑UV色谱条件的建立色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：乙腈‑0.01％三氟乙酸溶液(30:70)；检测波长：200～220nm；流速：0.8～1.2mL·min‑1；柱温：20～50℃；进样量：2～20μL；(4)特征图谱的构建分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对所得色谱图进行处理，得到地乌药材的对照特征图谱，采用计算相对保留时间的方法确定共有峰的辨认；其特征在于，步骤(3)所述色谱柱为Phenomenex Luna C18柱，规格为4.6mm×250mm,5μm，或Cosmosil 5C18‑MS‑Ⅱ柱，规格为4.6mm×250mm,5μm，或Ultimate XB‑C18柱，规格为4.6mm×250mm,5μm；步骤(4)所述地乌药材特征图谱中共有5个共有峰，其中，以4号峰flaccidoside Ⅱ为参照物峰，峰1为anhuienoside E，相对保留时间0.46；峰2为glycoside St‑14a，相对保留时间0.53；峰3为hemsgiganoside B，相对保留时间0.66；峰4为flaccidoside Ⅱ，相对保留时间1.00；峰5为hederasaponin B：相对保留时间1.07；各色谱峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。