[发明专利]一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒

摘要

本发明提供一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒，由核酸共提取液、四重RT‑qPCR反应液、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品、五个浓度的阳性定量标准品组成。本发明可简便快速地在一个反应管中同时、平行地检测四种常见儿童呼吸道病毒(RSV、INF、HMPV、ADV)的感染，实现了单管PCR同时检测四种不同类型核酸的病毒，且能够定量检测，操作简单快速，灵敏度高，特异性、重复性好，结果准确可靠，并可根据所检测的病毒核酸拷贝数的大小为呼吸道病毒感染患者提供早期明确诊断和防治，监测临床疗效，对阻断传染源、减少病毒感染或监测及鉴别诊断多种病毒混合感染均有极大的临床价值。

主权项

1.一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒，由核酸共提取液、四重RT‑qPCR反应液、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品、五个浓度的阳性定量标准品组成，其特征在于：其中四重RT‑qPCR反应液为四组引物、探针以及RT‑qPCR反应缓冲液、Hot Start Taq DNA聚合酶、PrimeScrip RT逆转录酶构成的混合液，其中强阳性质控品浓度10⁶Copies/μl ，弱阳性质控品浓度10²Copies/μl ，五个浓度阳性定量标准品是由RSV、INF、HMPV、ADV等量混合的质粒样品，浓度分别为10²Copies/μl 、10³Copies/μl 、10⁴Copies/μl 、10⁵Copies/μl 、10⁶Copies/μl；强、弱阳性质控品为由RSV、INF、HMPV、ADV等量混合的阳性质粒样品；四种呼吸道病毒包括三种RNA病毒： RSV、INF、HMPV和一种DNA病毒：ADV；所述的引物及其特异性定量PCR荧光探针序列、标准品序列如下：RSV：上游引物：GCACCGCCAAGACACTAGAA下游引物：GTGGTTTGCCGAGGCTATGA探针：JUP(VIC)‑ GGA CCT GGG ACA CTC TCA ATC ATC T ‑JUPINF：上游引物：ACACCATCTGTGTGGGCTAC下游引物：CCGTTCAGACTGCAGAGCTT探针：MAR(FAM)‑ CTC TAC AGA CAC TGT TGA CAC AGT ACT AG –MARHMPV上游引物：GGGAGCAAAGCAGAAAGTTTGT下游引物：TTGCACAGACACATGCCCTA探针：NEP‑GCT TAT GGA GCT GGT CAA ACA CTG C‑NEPADV：上游引物：TAAGACTCTCGTCCATTTGGTCA下游引物：CTTAACATCGCCGCCAAGGAG探针：SAT‑CACAATCTTCTTGTTGTCCAGCTTGG‑SATRSV标准品序列：gcaccgcc aagacactag aaaggacctg ggacactctcaatcatctat tattcatatc atcgtgctta tacaagttaa atcttaaatc tatagcacaa atcacattat ctattttggc aatgataatc tcaacctcac ttataattgc agccatcata ttcatagcct cggcaaacca cINF标准品序列：acaccatctgtgtgggctaccatgca aacaactcta cagacactgt tgacacagta ctagaaaagaatgtgaccgtgactcactcagtgaatttgctcgaagacagccataatggg aagctctgca gtctgaacggHMPV标准品序列：ggag caaagcagaa agtttgtttgtaaatatatt tatgcaagct tatggagctg gtcaaacact gctaaggtgg ggtgtcattgccagatcatc caacaacata atgctagggc atgtgtctgt gcaaADV标准品序列：t aagactctcgtccatttggt cagaaaacac aatcttcttg ttgtccagct tggtagcaaa tgatccatagagggcattgg atagaagctt ggcgatggag cgcatggttt ggttcttttc cttgtccgcgcgctccttgg cggcgatgtt aag。