[发明专利]食品级纳豆激酶表达菌

摘要

本发明公开了一种食品级纳豆激酶表达菌，该重组菌是经过改造使得基因组中含有至少一个拷贝纳豆激酶基因的地衣芽胞杆菌。优选地，该表达菌基因组中负调控因子基因hrcA失活。本发明的生产菌株符合食品级表达系统的要求，纳豆激酶基因多个拷贝无痕整合到地衣芽胞杆菌基因组中表达，表达量比现有技术显著提高显著，通过失活负调控基因hrcA，酶活力和表达量进一步提高，酶活力达到1350FU/mL，蛋白含量达1.45g/L。本发明中重组菌制备的纳豆激酶，纯度较高，可以加工成保健品或作为疗脑梗塞药物的有效成分。

主权项

1.食品级纳豆激酶表达菌，其特征在于，是经过改造使得基因组中含有至少一个拷贝纳豆激酶基因的地衣芽胞杆菌；纳豆激酶基因前具有启动子，纳豆激酶基因后具有终止子；表达菌基因组中负调控因子基因hrcA失活；所述改造是采用无痕敲入的方式，使用温敏型敲入载体将纳豆激酶基因整合到地衣芽孢杆菌的基因组上；所述温敏型敲入载体是将pWEBK15质粒复制子替换成温敏型复制子，插入或不插入荧光蛋白基因，以及插入纳豆激酶蛋白基因构建而成的；其中纳豆激酶蛋白基因上游连接地衣芽胞杆菌基因组中胞外蛋白酶基因的上游序列，纳豆激酶蛋白基因下游连接地衣芽胞杆菌基因组中该胞外蛋白酶基因的下游序列；所述胞外蛋白酶基因为apr、mpr、bpr2、vpr、epr或bpr1；所述纳豆激酶基因的启动子为：纳豆激酶基因原始启动子，或来自地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因的启动子；所述纳豆激酶基因的终止子为纳豆激酶基因原始终止子。