[发明专利]BACE1剪切型高效价抗体的制备及应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及利用GST表达体系制备的BACE1剪切型高效价抗体及应用。利用基因工程技术将BACE1剪切型基因克隆到原核表达载体中，酶切鉴定后用重组质粒转化大肠杆菌，IPTG诱导产生GST‑BACE1_146‑189aa和GST‑BACE1_190‑214aa融合蛋白，以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清并用ProteinA/G纯化。这两种抗BACE1剪切型多克隆抗体效价与特异性良好，可以应用于细胞中BACE1不同剪切型52KD、49KD的检测以及四种剪切型的区分，并能有效检出BACE1剪切型在不同细胞中的差异表达，对于系统研究BACE1功能及其在AD中的作用机制意义重大。

主权项

发明保护两种抗体共同用于BACE1四种剪切型55KD、52KD、49KD和47KD的区分，以及这两种抗体用于BACE1剪切型中52KD和49KD的鉴定；用于区分BACE1四种剪切型55KD、52KD、49KD和47KD的2个抗体片段分别为：BACE1_146‑189aa(insert1)，BACE1_190—214aa(insert2)；BACE1剪切型BACE1_146‑189aa(insert1)BACE1_190—214aa(insert2)BACE1—55KD√√BACE1—52KD√×BACE1—49KD×√BACE1—47KD××注：表中“√”表示包含该片段且能被该抗体识别，“×”表示不包含该片段且不能被该抗体识别；抗体BACE1_146‑189aa可用于识别BACE1剪切型55KD和52KD，抗体BACE1_190—214aa可用于识别BACE1剪切型55KD和49KD；BACE1剪切型55KD可同时被抗体BACE1_146‑189aa和抗体BACE1_190—214aa识别；BACE1剪切型52KD只可被抗体BACE1_146‑189aa识别；BACE1剪切型49KD只可被抗体BACE1_190—214aa识别；BACE1剪切型47KD既不能被抗体BACE1_146‑189aa识别，又不能被抗体BACE1_190—214aa识别；因此这两种抗体可以用于四种剪切型55KD、52KD、49KD和47KD的区分。