[发明专利]一种利用叶片为受体建立酸枣遗传转化体系的方法

摘要

本发明涉及一种利用叶片为受体建立酸枣遗传转化体系的方法，属于植物细胞工程和分子生物学技术领域。将酸枣叶片接种于WPM不定芽启动培养基中暗培养诱导2～4d，得到外植体；将含有植物表达载体的农杆菌菌液侵染外植体，得到被侵染的外植体；将被侵染的外植体置于WPM固体培养基上，暗培养2～4d；将暗培养后的叶片转入WPM固体筛选培养基中进行暗培养，共暗培养14～16d后移至光下，在含0.1mg/L吲哚乙酸和0.5mg/L赤霉素的WPM培养基中进行叶片再生的伸长培养，得到不定芽，将不定芽转到MS培养基中进行扩繁，得到遗传转化后的酸枣植株。本发明提供的酸枣遗传转化体系方法为酸枣提供了合适的再生体系，且转化频率高，重复性高，有利于酸枣的遗传改良。

主权项

1.一种利用叶片为受体建立酸枣遗传转化体系的方法，包括以下步骤：1)将酸枣叶片接种于WPM不定芽启动培养基中暗培养诱导2～4d，得到外植体，所述WPM不定芽启动培养基包括0.8～3.0mg/L噻苯隆、0.2～0.5mg/L吲哚丁酸、28～32g/L蔗糖和5～7g/L琼脂；2)将含有植物表达载体的农杆菌菌液侵染所述步骤1)得到的外植体，得到被侵染的外植体；3)将所述步骤2)得到的被侵染的外植体置于WPM固体培养基上，暗培养2～4d，所述WPM固体培养基包括0.5～2.0mg/L噻苯隆和0.25～0.4mg/L吲哚丁酸；4)将所述步骤3)暗培养后的叶片转入WPM固体筛选培养基中进行暗培养14～16d，所述WPM固体筛选培养基含有0.8～2.5mg/L噻苯隆、0.2～0.4mg/L吲哚丁酸、180～220mg/L头孢霉素和15～25mg/L卡那霉素；所述暗培养结束后，转入WPM伸长培养基中进行叶片再生的伸长培养，得到不定芽，所述WPM伸长培养基含有0.1mg/L吲哚乙酸和0.5mg/L赤霉素的；5)将所述步骤4)得到的不定芽扩繁，得到遗传转化后的酸枣植株；所述步骤2)中植物表达载体为pBI121‑SPDS。