[发明专利]一种酪氨酸酶辅助的荧光增强型酪氨酸蛋白激酶活性分析方法

摘要

本发明公开了一种酪氨酸酶辅助的荧光增强型酪氨酸蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标酪氨酸蛋白激酶与其对应的荧光标记的多肽底物混合，使多肽中酪氨酸发生磷酸化，酪氨酸酶能够将未磷酸化酪氨酸残基上的酚羟基氧化成邻苯醌而猝灭底物的荧光，而磷酸化底物上酪氨酸酚羟基被磷酸基团保护不会被氧化，对多肽上标记的荧光分子不会产生猝灭作用。因此，在酪氨酸酶的辅助作用下，通过检测体系中荧光信号的增强情况，即可实现酪氨酸蛋白激酶活性的定量分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与酪氨酸酶混合后即可进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了酪氨酸蛋白激酶活性的快速灵敏分析。同时本发明可用于酪氨酸蛋白激酶抑制剂的筛选。

主权项

1.一种酪氨酸酶辅助的荧光增强型酪氨酸蛋白激酶活性分析方法，其特征在于它由下述步骤组成：（1）将已知活性的酪氨酸蛋白激酶与其对应的荧光标记的多肽底物混合进行磷酸化反应，其中所述荧光标记的多肽底物中的荧光标记物为羧基四甲基罗丹明、2,7‑二甲基‑4,5‑二氯‑6‑羧基荧光素、四氯‑6‑羧基荧光素、六氯‑6‑甲基荧光素、德克萨斯红、3H‑吲哚菁染料中的任意一种；（2）将步骤（1）中磷酸化反应后的溶液与酪氨酸酶混合后检测体系的荧光强度，绘制荧光强度随酪氨酸蛋白激酶活性变化的标准曲线；（3）按照上述步骤（1）和（2）检测待测酪氨酸蛋白激酶样品对应的荧光强度，根据标准曲线即可实现待测样品中酪氨酸蛋白激酶活性的定量分析。