[发明专利]一种表达绿色荧光蛋白的中国被毛孢Hirsutella sinensis转化菌株及其制备方法有效
| 申请号： | 201610343929.3 | 申请日： | 2016-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN107418965B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 蓝贤清;苏文;赵成;向金鹏;方呈祥 | 申请（专利权）人： | 成都图径生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/65;C12N1/15;C12R1/645 |
| 代理公司： | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峡;张娟 |
| 地址： | 610000 四川省成都*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备表达绿色荧光蛋白的中国被毛孢Hirsutella sinensis转化菌株的方法，步骤如下：(1)制备中国被毛孢Hirsutella sinensis芽生孢子悬浮液；(2)制备含有重组质粒pRF‑AETH的根癌农杆菌；(3)制备根癌农杆菌菌液；(4)将中国被毛孢Hirsutella sinensis芽生孢子悬浮液与根癌农杆菌菌液混合，共培养；(5)选择性培养，鉴定，获得稳定表达绿色荧光蛋白的中国被毛孢Hirsutella sinensis。本发明还提供了一种中国被毛孢Hirsutella sinensis转化菌株。本发明方法可以获得稳定表达egfp基因的中国被毛孢Hirsutella sinensis转化菌株。该转化菌株不仅可以为中国被毛孢Hirsutella sinensis功能基因的分子生物学研究提供方便，而且可以监测中国被毛孢Hirsutella sinensis在寄主昆虫体内的生长与繁殖、发育与分化的过程,为阐明中国被毛孢Hirsutella sinensis与寄主的相互作用提供直接证据，应用前景优良。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 绿色 荧光 蛋白 中国 被毛孢 hirsutella sinensis 转化 菌株 | ||
【主权项】：
一种制备表达绿色荧光蛋白的中国被毛孢Hirsutella sinensis转化菌株的方法，其特征在于：步骤如下：(1)制备中国被毛孢Hirsutella sinensis芽生孢子的悬浮液；(2)制备根癌农杆菌感受态，转化重组质粒pRF‑AETH，获得含有重组质粒pRF‑AETH的根癌农杆菌；其中，重组质粒pRF‑AETH是将质粒pRFHUE‑eGFP中的启动子pGpdA、Trpc分别替换为虫生真菌启动子pAT、pTrpc的质粒，虫生真菌启动子pAT、pTrpc的序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；(3)取步骤(2)制得的含有重组质粒pRF‑AETH的根癌农杆菌，制备根癌农杆菌菌液；(4)将步骤(1)制备的中国被毛孢Hirsutella sinensis芽生孢子悬浮液与步骤(3)制备的根癌农杆菌菌液混合，共培养；(5)选择性培养，鉴定，获得表达绿色荧光蛋白的中国被毛孢Hirsutella sinensis。
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