[发明专利]一种细菌表面ABO血型抗原的检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细菌表面的ABO血型抗原的检测方法。所述检测方法基于细菌表面多糖的结构与人类ABO血型抗原相似而具有血型物质活性的特点，通过细菌固定化处理并利用人的ABO血型天然抗体与细菌表面多糖相互作用，以多功能酶标仪实现细菌表面ABO血型抗原的检测。利用本发明提供的细菌表面ABO血型抗原的检测方法，简单易操作，稳定性好，能够实现大批量检测，克服了之前的检测方法需靠肉眼观察凝集情况的弊端，结果更直观可靠，具有极大的应用前景。

主权项

1.一种细菌表面ABO血型抗原的检测方法，其特征在于：通过细菌固定化处理并利用人的ABO血型天然抗体与细菌表面多糖相互作用，以多功能酶标仪实现细菌表面ABO血型抗原的检测；所述细菌指革兰氏阴性的所有同一种类的细菌、革兰氏阳性的所有同一种类的细菌或分离的肠道菌群；所述ABO血型天然抗体来源于鼠的或IgM型抗血型B物质抗体；所述检测方法的步骤如下：（1）肠道菌群的分离提取；（2）菌体的固定；（3）菌体表面ABO血型抗原活性的检测；所述菌体的固定步骤为：1）将从粪便样品中分离的菌体分别用1 mL PBS重悬后，加入4 mL的Karnovsky溶液，充分混匀，在4℃下放置30 min；2）在其中加入25 mL PBS混匀，7 000 rpm离心7 min；3）弃去上清后迅速用含有6%BSA的PBS溶液充分重悬，确保重悬液中无颗粒状物质；4）将重悬液转移至干净的1.5 mL离心管中后放置3 min，随后7 000 rpm离心7 min；5）弃去上清后，用含有0.6% BSA的PBS溶液充分重悬，并确保重悬液中无颗粒状物质，7000 rpm离心7 min；6）重复步骤5）一次，最后将菌体用1 mL PBS重悬并保存在4℃下。