[发明专利]一种大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法

摘要

本发明公开了一种大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法，包括以下步骤培养基的制备，将莱氏野村菌分生孢子均匀撒在pH为6.5~8.5的培养基上，得到莱氏野村菌分生孢子接种的培养基，所述莱氏野村菌分生孢子接种培养基的分布密度为0.5~3个/cm2，对接种培养基于温度24~30℃，湿度为75~90%的光照环境中，96~120小时后在培养基表面得到半透明液滴状的莱氏野村菌酵母型细胞，然后将莱氏野村菌酵母型细胞进行扩大培养；本发明的大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法，酵母型细胞的生长期持续时间长，酵母型细胞向菌丝状态转换的时间相应的延迟，因而可以提高酵母型细胞的产量，并且在显微镜镜检中检测不到菌丝体，纯度高。

主权项

一种大批量培养高纯度莱氏野村菌酵母型细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：①将麦芽糖，蛋白胨和酵母膏加入到蒸馏水中溶解，然后加入琼脂粉搅拌均匀，加入hepes调节pH至7.5，得到混合液，将所得混合液在121℃下灭菌25分钟，然后均匀倒在平板上至2.5毫米的厚度，冷却后得到培养基；所述麦芽糖、蛋白胨、酵母膏、琼脂粉和蒸馏水的重量体积比为4g：1g：1g：1g：93ml；②用灭菌的接种器蘸取莱氏野村菌分生孢子，置于步骤①得到的培养基表面上方5~7厘米处，敲击接种器，将莱氏野村菌分生孢子均匀撒在步骤①得到的培养基上，得到莱氏野村菌分生孢子接种的培养基，所述莱氏野村菌分生孢子接种培养基的分布密度为2个/cm2；所述接种器为接种环、接种针或玻璃棒；③将步骤②所得莱氏野村菌分生孢子接种的培养基置于温度26℃，湿度为80%的光照环境中，96小时后在培养基表面得到半透明液滴状的莱氏野村菌酵母型细胞；④用灭菌的工具刮取步骤③所得的莱氏野村菌酵母型细胞至步骤①所得的培养基表面，用涂布器涂布均匀，置于温度24~30℃，湿度为75~90%的光照环境中，24~36小时后得到7~15倍接种量的高纯度莱氏野村菌酵母型细胞；所述涂布器为不锈钢筷子或顶端烧圆的玻璃棒；所述工具为方嘴平头镊子。