[发明专利]一种植物细胞规模培养方法

摘要

本发明涉及一种植物细胞规模培养方法。本发明公开了一种体外规模化悬浮培养扩增铁皮石斛细胞的方法，其培养过程是石斛带休眠芽茎段，插入到适宜固体培养基上，待愈伤组织长出后或胚状体诱导出后，将其剥离扩增，扩增后将愈伤组织/胚状体进行匀浆酶解、研磨或喷雾等理化手段分解为单细胞悬液，摇床培养，经数次继代适应悬浮培养后，转入大规模生物反应器中进行连续扩增10‑25天，待达到生长密度后，通过调节生物反应器中的指标、植物生长调节剂浓度及比例、更换培养基成分等手段，最终达到每20‑50天收获一次，或者连续、半连续收获，多糖含量达到20％以上，并保持常年稳定扩增的从20L‑吨级单元的大规模铁皮石斛细胞悬浮培养连续扩增体系。

主权项

一种体外规模化悬浮培养扩增植物细胞的方法，其培养过程是：将植物愈伤组织使用常规方法进行扩增培养，得到扩增后的愈伤组织或胚状体，将愈伤组织或胚状体组织进行匀浆酶解、研磨或喷雾等理化手段分解为单细胞悬液，将细胞种子按一定接种比例接种到生物反应器中，通过调节氧含量在30‑50％之间，pH为5‑7，固定光源光照10‑20h，光照强度2000‑8000Lx，培养分阶段进行，每一阶段为10‑25天，不同阶段的光质交替变换，所述的光质为红蓝光，所述的交替变换为红蓝光比例由第一阶段的2‑3:4‑5调整为第二阶段的3‑4:4‑6，再由第二阶段的3‑4:4‑6调整为第三阶段的2‑3:4‑5，并以此模式循环；每阶段更换新鲜液体培养基一次。每15‑25天收获植物细胞系培养物的30‑50％，并补充相应比例的新鲜液体培养基，培养持续进行；所述液体培养基为基本培养基中添加植物生长调节剂，植物生长调节剂为生长素、细胞分裂素的组合或生长素、细胞分裂素与ABA的组合，生长素与细胞分裂素比例控制在3:1，总浓度在0.05‑5mg/L调整。