[发明专利]一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，属于抑制剂制备技术领域。本发明针对现有的酪氨酸酶抑制剂稳定性差，对于酪氨酸酶的抑制效果差的问题，提供了一种首先利用紫茄子内的酪氨酸酶做引发物，以仙鹤草等物质内的有益物作促进剂及稳定保护酪氨酸酶抑制剂，再将其与营养物混合，对黄曲霉进行培养，促进其产生酪氨酸酶抑制剂，并进行保护，再添加焦磷酸钠进行除杂，同时增加酪氨酸酶抑制剂效率，最后将过滤液旋转蒸发，脱色，浓缩，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂的方法。本发明制备的复合酪氨酸酶抑制剂稳定性好，抑制效果好。本发明制备的复合酪氨酸酶抑制剂不易水解，稳定性提高15～17％；且对酪氨酸酶活性抑制率达到98％以上。

主权项

一种复合酪氨酸酶抑制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，取40～50份仙鹤草、22～28份檞树皮、10～15份柴胡及14～18份紫茄子，放入碾磨机中进行碾磨，在碾磨过程中向碾磨机中加入蒸馏水，使碾磨混合物的含水量为45～50％，待混合物碾磨成浆状后，使用质量分数为20％磷酸溶液调节浆状物pH至4.5～5.0；（2）在上述pH调节结束后，按重量份数计，取60～70份pH调节后的浆状物、20～30份琼脂、10～15份蔗糖、2～3份硫酸亚铁、1～2份磷酸氢二钾和1～3份磷酸二氢钾，搅拌均匀，使用蒸馏水调节其含水量为60～75％，再将混合物放置于紫外灯下进行杀菌消毒，得诱导分解培养基；（3）按接种量10～15％，将黄曲霉接种至上述诱导分解培养基中，将培养基移至摇床培养箱中，控制温度为25～28℃，转速为150rpm，培养2～4天，随后将培养基移至容器内，密封容器，使用氮气将容器内的气体置换出，对容器进行加热，设定温度为40～45℃，保持温度20～24h；（4）在上述保温结束后，自然冷却至室温，除去密封，向容器内加入仙鹤草质量1～2％的焦磷酸钠，搅拌均匀，静置5～6h，随后再向容器内加入焦磷酸钠质量1～2倍的正己烷和正己烷等体积的无水乙醇，以300r/min搅拌30～40min后，将容器内的混合物倒入离心机中，在5000r/min下离心分离10～15min，收集上清液；（5）将上述所得的上清液与其体积4～6％的pH为5.0的磷酸盐缓冲溶液混合均匀，并置于5℃下静置3～4h后进行过滤，收集过滤液并放入旋转蒸发仪中，在70～80℃下去除过滤液中的乙醇和正己烷，随后再将旋转蒸发仪中的剩余液通过活性炭进行脱色，将脱色后的液体放入浓缩罐中进行浓缩至原体积的30～40％，收集浓缩液，即可得到复合酪氨酸酶抑制剂。