[发明专利]一种在家蚕丝腺中表达重组I型类人胶原蛋白的方法在审
| 申请号： | 201610289773.5 | 申请日： | 2016-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN105969800A | 公开（公告）日： | 2016-09-28 |
| 发明（设计）人： | 徐豫松;王华兵;占鹏飞 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开一种在家蚕丝腺中表达重组I型类人胶原蛋白的方法，利用家蚕后部丝腺生产具有广泛用途和经济价值的Ⅰ型类人胶原蛋白。该方法获得的重组I型类人胶原蛋白能够在家蚕丝腺中稳定表达，并在后代延续。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 在家 蚕丝 表达 重组 型类人 胶原 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种在家蚕丝腺中表达重组I型类人胶原蛋白的方法，其特征在于：包括：(1).构建转基因载体pBFLHCool‑I‑FLBmP4Hα‑A3EGFP；(2).将转基因质粒pB FL‑HCool‑I‑pA‑FL‑BmP4Hα‑pA‑A3EGFP和pHA3PIG质粒以浓度比为1﹕1，总DNA浓度为400 ng/μL的比例混合，通过显微注射将转基因质粒注射入产后2～5 h以内的家蚕蚕卵中，每粒蚕卵注射10～15 nL，注射后立即用无毒胶水封闭注射孔，经甲醛蒸气再次消毒后,经显微注射后的蚕卵放在25℃、90%湿度的培养箱中培育孵化；(3).G1代的幼虫或蛹置于体视荧光显微镜下筛选阳性个体，5龄4天幼虫使用小动物活体成像系统确认幼虫阳性EGFP荧光。
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