[发明专利]一种快速检测乳及乳制品中阪崎克罗诺杆菌的试剂盒

摘要

一种快速检测乳及乳制品中阪崎克罗诺杆菌的试剂盒，该试剂盒包含：无菌去离子水、PCR反应预混液、对照品；PCR反应预混液中除含有阪崎克罗诺杆菌的1对特异性引物外还含有1对原核生物16S rRNA基因序列的通用引物作为扩增内标。本试剂盒的使用方法是：首先采集样品，利用无菌营养肉汤培养基进行增菌培养，提取DNA备用；利用试剂盒中的材料制备包括空白阴性、阴性阴性、阳性对照和检测样品的PCR反应管，置于PCR仪上，根据说明书中的反应体系与反应条件进行扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据说明书判定结果。本试剂盒可以用于阪崎克罗诺杆菌的快速检测、流行病学调查等，其优点是与现有的检测方法相比，能够避免因样品或制备过程中存在DNA聚合酶抑制剂或操作失误使结果呈假阴性现象而导致的结果误判，对提高食品质量与安全及食品检测水平具有一定现实意义。

主权项

一种快速检测乳及乳制品中阪崎克罗诺杆菌的试剂盒，其特征是：该试剂盒包含：无菌去离子水、PCR反应预混液、对照品和DNA染料；所述PCR反应预混液含有PCR反应缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、Taq DNA聚合酶，检测用引物；所述检测用引物为阪崎克罗诺杆菌的1对特异性引物grxBF、grxBR和1对扩增内标引物27F、1492R，其序列分别为：grxBF：AGCGGGAAGAGGATGAAATCGGTGGgrxBR：GGATATTGTGCGTTACGTGGATGGG27F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG；1492R：TACGGYTACCTTGTTACGACTT；所述对照品分为空白对照品、阴性对照品和阳性对照品；空白对照品为无菌去离子水作为模板，阴性对照品为大肠杆菌TOP的16S rRNA基因扩增产物连接至T载体后获得的质粒基因组作为模板，阳性对照品为 grxBF/grxBR的扩增产物连接至T载体后获得的质粒基因组作为模板。