[发明专利]快速鉴定甘蔗抗褐锈病基因位点的分子标记引物及应用

摘要

本发明提供了一种快速鉴定甘蔗抗褐锈病基因位点的分子标记引物及应用，分别以待鉴定甘蔗和“POJ2878”的基因组DNA为模板，利用引物1、引物2、引物3、引物4进行扩增，将扩增的PCR产物利用限制性核酸内切酶HaeIII进行酶切，通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，与抗褐锈病甘蔗品种POJ2878的酶切产物（分别为389bp和606bp）进行比较，来判断所待鉴定甘蔗的抗病性。本发明方法可用于甘蔗抗褐锈病基因的图位克隆和分子标记辅助选择，通过检测抗褐锈病基因位点来预测待鉴定甘蔗对褐锈病的抗性，不仅节约生产成本而且大大提高选择效率，进而加速甘蔗抗褐锈病育种进程。

主权项

1.一种快速鉴定甘蔗抗褐锈病基因位点的分子标记方法，其特征在于：包括如下步骤：分别以待鉴定甘蔗和“POJ2878”的基因组DNA为模板，PCR 扩增体系：2×Premix Ex TaqMix PCR Buffer 12.5μL，10μmol/L引物1、引物2、引物3和引物4 各0.5μL，25 ng/μL模板DNA 2μL，加灭菌双蒸水使总体积为25μL；扩增程序如下：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 S，56 ℃ 30 S，72 ℃ 40 S，34个循环；72℃ 7 min；将扩增的PCR产物利用限制性核酸内切酶HaeIII 进行酶切，通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，按照如下方法确定待鉴定甘蔗对褐锈病的抗性：如果待鉴定甘蔗的酶切产物电泳条带有与POJ2878带型相同的条带，分别为 389 bp 和 606 bp，则待鉴定甘蔗为抗褐锈病甘蔗，如果待鉴定甘蔗的酶切产物电泳条带没有与POJ2878带型相同的条带，则待鉴定甘蔗为非抗褐锈病甘蔗，酶切产物经过胶回收及测序，抗性片段大小为389 bp 和 606 bp，其余条带为非特异性扩增；所述引物1 为：F‑1033‑5’‑ AGGTTTGTCTGGTGGGAACT ‑3’；引物2为： R‑1638‑5’‑ CTTACCCTGTGTGCAATGGG ‑3'；引物3为：29‑5’‑TTTATAAATTACCATTAAGGACCAT‑3’；引物4为：417‑5’‑ CAGCATTTAAGATGGCATAGGCGTC‑3’。