[发明专利]一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。采用CeO2@Cu2O/Au@Pt作为检测抗体标记物制备的电化学免疫传感器具有特异性强，灵敏度高和检出限低等优点，对肝癌肿瘤标志物的检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：（a）将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（b）以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液，在‑0.2 V电压下扫描30s，将金电沉积到电极表面，用超纯水冲洗，晾干；（c）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；（d）续将3 µL、质量分数为0.5 ~ 2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；（e）滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；（f）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt‑Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器；所述CeO2@Cu2O/Au@Pt‑Ab2检测抗体孵化物溶液的制备，包括以下步骤：（1）CeO2@Cu2O的制备将8 ~ 12 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液，充分搅拌0.5 h；继续将8 ~ 12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中， 55℃下充分搅拌5h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12h，制得Cu2O立方纳米晶体；将1 ~ 3 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25 mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合，超声30min；转移到40℃油浴，逐滴加入18 ~ 22 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液，反应1~2 h；离心分离，用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次，室温下真空干燥12 h，得到CeO2@Cu2O；（2）NH2‑CeO2@Cu2O的制备将0.03 ~0.07 g的CeO2@Cu2O加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.2~ 0.4 mL的3‑氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5 ~ 2.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80℃干燥12h，得到NH2‑CeO2@Cu2O；（3）Au@Pt核壳纳米粒子的制备金纳米粒子溶液是用100mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾，加入2.5 mL、浓度为10 mg/mL的柠檬酸钠溶液，回流1.5h，冷却至室温，得到酒红色的金纳米粒子溶液；75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃，磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6，反应20min，制成Au@Pt核壳纳米粒子；（4）CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备将4 ~ 8 mg 的NH2‑CeO2@Cu2O加入到25mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中，振荡24h，离心分离，得到CeO2@Cu2O/Au@Pt，分散到2mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中，制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液；（5）CeO2@Cu2O/Au@Pt‑Ab2检测抗体孵化物溶液的制备在2 mL、2 ~ 4 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中，加入2 mL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液，得到CeO2@Cu2O/Au@Pt‑Ab2检测抗体孵化物溶液，4℃下保存备用。