[发明专利]一种人体胃中微生物总DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种人体胃中微生物总DNA的提取方法，本发明提取方法是在现有提取方法的基础上加入了对胃提取液的前处理步骤，从而有效解决了由于样品低pH因素和人体基因组DNA干扰导致的提取效率低和效果差的问题，本发明的提取方法相较于现有方法其提取效率提高了一倍以上，所提取的微生物DNA浓度高，微生物总DNA占有比例高，16S rRNA v1‑v2区PCR产物条带明亮清晰，进而能够更加准确全面反应胃中的微生物状况，为后续微生物群落结构与功能的研究奠定了基础。

主权项

1.一种人体胃中微生物总DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将等体积的胃冲洗液和乙醇溶液混合，于‑20℃下静置一段时间，将静置后的物料于4℃下离心分离，离心分离后去除上清液，得到固相A；步骤2，向步骤1的固相A中加入所需量的缓冲液，混合均匀后将混合物料于4℃下进行第一次离心分离，离心分离后去除上清液，保留固相；将所得的固相于4℃下进行第二次离心分离，离心分离后去除上清液，得到固相B；所述缓冲液的配方为：每1L缓冲液中，含有137mmol氯化钠、2.7mmol氯化钾、10mmol磷酸氢二钾以及2mmol磷酸二氢钾；步骤3，向步骤2的固相B中依次加入所需量的蛋白酶K和缓冲液，混合均匀后于56℃下进行水浴加热，加热后得到液相C；步骤4，将步骤3的液相C使用DNA提取试剂盒进行微生物总DNA的提取，得到总DNA，再使用微量紫外可见分光光度计，进行DNA总含量的测定；步骤5，聚合酶链式反应扩增：PCR扩增16S rRNA v1‑v2区，得到的PCR产物采用琼脂糖凝胶进行电泳检测，最终得到微生物总DNA的质量。