[发明专利]一种酸奶DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种从酸奶中提取DNA的方法，包括以下步骤：提取酸奶上清液a；上清液a离心处理，取沉淀，加入CTAB裂解液和溶菌酶，孵育，再加入蛋白酶k，孵育，离心，取上清液c，等体积氯仿洗涤后离心，取上清液d，加入2倍体积CTAB沉淀液沉淀，再离心得到初沉淀；用NaCl溶液溶解初沉淀，加入等体积氯仿再次洗涤，吸取上清液e，加入异丙醇沉淀，离心得到DNA沉淀，加入70％乙醇洗涤，去除乙醇，得到酸奶DNA；有效解决了酸奶由于基质复杂所致的核酸提取困难，提取率低的问题，该方法无污染，成本低，操作快速简便。经检测本发明提取得到的酸奶核酸纯度高，可用于PCR扩增和illumina深度测序，为掌握市售酸奶中益生菌群落分布情况提供了技术基础。

主权项

一种酸奶DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一，提取酸奶上清液：1000‑8000r/min离心2‑10min，分离上清液和乳质固体，取上清液a；步骤二，酸奶DNA提取：取步骤一制得的上清液a，对其12000r/min离心10min后，弃取上清液b，往沉淀中加入CTAB裂解液和溶菌酶，30‑40℃孵育25‑35min，再加入蛋白酶k 60‑70℃孵育60min；孵育完成后离心，取上清液c，用等体积氯仿洗涤后离心，取上清液d，加入2倍体积CTAB沉淀液沉淀60min，再离心得到初沉淀；其中，所述CTAB裂解液由20μl/L CTAB、0.1mol/L Tris、1.4mol/L NaCl、20mmol/L Na₂‑EDTA配制而成；所述CTAB沉淀液由5g/L CTAB、0.04mol/L NaCl配制而成；步骤三，重复提取纯化：用1.2mol/L NaCl溶液溶解步骤二制得的初沉淀，加入等体积氯仿再次洗涤，吸取上清液e，加入0.8倍异丙醇沉淀30min后，离心得到DNA沉淀，加入70％乙醇洗涤，去除乙醇，得到酸奶DNA。