[发明专利]ACE抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种ACE抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物及其制备方法。本发明ACE抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物：其命名为YQK(Me)FPQYLQY，其氨基酸序列为Tyr‑Gln‑Lys(Me)‑Phe‑Pro‑Gln‑Tyr‑Leu‑Gln‑Tyr。本发明制备方法如下：称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸；添加试剂鼓泡反应后洗净，然后依次Gln、Lys(Me)、Phe、Pro、Gln、Tyr、Leu、Gln、L‑Tyr，反应结束后得到粗肽产物。本发明在保持ACE抑制十肽YQKFPQYLQY的降血压活性的同时，提高了其热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性，以便于该ACE抑制十肽在工业化的生产及流通环节中能够保持其活性。

主权项

一种ACE抑制十肽的赖氨酸甲基化衍生物的制备方法，其特征是，按照下述步骤进行：1)称取1g王树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀半小时，然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基酸：1mmol当量的L型酪氨酸，1mmol的N,N‑二异丙基碳二亚胺；1mmol的4‑二甲氨基吡啶，6‑10ml的富马酸二甲脂溶液，用氮气鼓泡反应3h；然后加入1ml吡啶，1ml乙酸酐，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、二氯甲烷洗净；2)加入6‑10ml哌啶去除9‑芴甲氧羰基保护基，洗净，并用茚三酮检测；3)向反应器中加入序列中第二个氨基酸谷氨酰胺(Gln)3mmol，3mmol 1‑羟基苯并三氮唑及N,N‑二异丙基碳二亚胺，氮气鼓泡反应一小时，抽掉液体，用二甲基甲酰胺洗净，并用茚三酮检测；4)依步骤2、3的方式依次加入序列中第三个氨基酸Lys(Me)、第四个氨基酸Phe、第五个氨基酸Pro、第六个氨基酸Gln、第七个氨基酸Tyr、第八个氨基酸Leu、第九个氨基酸Gln、第十个氨基酸L‑Tyr，直至最后第十个氨基酸L‑Tyr反应结束，其中第三个氨基酸为经过甲基化的赖氨酸；5)加6‑10ml的95％三氟乙酸切割液，震荡反应2h，将氨基酸的侧链保护基团裂解下来，得到粗肽产物；6)分析提纯和质谱检测：用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪检测该序列分子量的正确性，用高效液相色谱将粗肽提纯至90％纯以上；7)收集步骤6)纯化好的目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩冻干，冻干成白色粉末得到ACE抑制肽YQKFPQYLQY的赖氨酸甲基化衍生物。