[发明专利]一种尿促性腺激素的纯化方法

摘要

本发明涉及制药领域，具体涉及一种尿促性腺激素的纯化方法。取绝经期妇女尿液超滤浓缩后，将超滤液用聚乙二醇醚‑硫酸铵双水相体系萃取两次后，得含尿促性腺激素的有机相，有机相在水浴中处理后分相，离心，得含尿促性腺激素的水相，将水相过超滤膜后上羟基磷灰石层析柱收集洗脱液，在洗脱液中加乙醇溶液调酒精度，静置，过滤得沉淀物，干燥得纯化后的尿促性腺激素。本发明提供了一种尿促性腺激素的纯化方法，得到的尿促性腺激素中卵泡刺激素和黄体生成激素生物效价高、活性回收率好，而且本方法操作简单、容易工业化生产。

主权项

1.一种尿促性腺激素的纯化方法，其特征在于采用以下步骤：(1) 聚乙二醇醚‑硫酸铵双水相体系配制：由质量分数为10‑20%聚乙二醇醚，10‑15%硫酸铵，余量为水组成双水相体系1；由质量分数为10‑20%聚乙二醇醚，18‑24%硫酸铵，余量为水组成双水相体系2；(2)原料液过截留分子量为10000的超滤膜，得超滤浓缩液, 维持浓缩液温度为15‑20℃，加入等体积的双水相体系1搅拌均匀，1000‑2000 r/min离心分离2‑5min，得含尿促性腺激素的聚乙二醇醚有机相和含杂质的水相；（3）将有机相在50‑70℃水浴10‑30min，溶液分成两相，1000‑2000 r/min离心分离2‑5min，得含尿促性腺激素的水相和聚乙二醇醚有机相；（4）步骤(3)中含尿促性腺激素的水相中加入等体积双水相体系2搅拌均匀，维持温度为15‑20℃，1000‑2000r/min离心分离2‑5min，得含有尿促性腺激素的聚乙二醇醚有机相和含杂质的水相，将有机相重复步骤（3）操作得含尿促性腺激素的水相；（5）步骤(4)中含尿促性腺激素的水相过截留分子量为10000的超滤膜，得超滤浓缩液；（6）步骤（5）中得到的超滤浓缩液上羟基磷灰石层析柱,依次经过PH为6.5‑7.0，含乙醇5‑15%v/v的0.4‑0.6moL/L醋酸钠溶液洗涤3个柱体积和PH为6.5‑7.0，含乙醇5‑15% v/v的0.3‑0.5moL/L的氯化钠溶液洗脱操作后，检测洗脱液在280nm的光密度值，当280nm处的吸光度值大于0.1时，开始收集洗脱液，280nm处的吸光度值小于0.1时停止收集；（7）步骤（6）中得到洗脱液中加入乙醇溶液调酒精度为80‑85%，静置12‑14h，过滤得沉淀物，沉淀物干燥后即为纯化后的尿促性腺激素。