[发明专利]一种基于光谱分辨原理的电致化学发光多组分免疫检测方法

摘要

本发明涉及一种基于光谱分辨原理的电致化学发光多组分免疫检测方法，以CdSe量子点和CdTe量子点为标记物，基于光谱分辨原理识别不同标记物的ECL信号，提供一种ECL多组分检测的方法。主要包括(1)三种量子点标记相应二抗(QDs‑Ab2)制备，(2)以三种量子点为标记物的多组分ECL免疫传感器制备和(3)多组分ECL免疫检测三个步骤。本发明方法检测的灵敏度高，癌胚抗原检测限达到1.0pg/mL，前列腺特异抗原检测限达到10.0pg/mL，甲胎蛋白抗原检测限达到10.0fg/mL，可以实现对多种抗原的同时检测；选择性高。

主权项

一种基于光谱分辨原理的电致化学发光多组分免疫检测方法，包括步骤如下：(1)多种量子点标记相应二抗的制备向含有巯基丙酸和六偏磷酸钠包被的多种量子点水溶液中加入含有1‑乙基‑3,3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺的缓冲溶液进行活化，离心纯化并分散在磷酸盐缓冲溶液中；然后加入相应二抗和小牛血清白蛋白，室温孵育2‑3h后离心纯化，所得沉淀物分散在磷酸盐缓冲溶液中，得多种量子点标记的二抗；(2)以多种量子点为标记物的多组分ECL免疫传感器的制备a、将玻碳电极抛光处理后，置于含对氨基苯甲酸的磷酸盐缓冲溶液中，在0.4～1.2V的电位范围内进行循环伏安扫描，制得对氨基苯甲酸修饰的玻碳电极，再用含有1‑乙基‑3,3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺的缓冲溶液进行活化，得修饰并活化后的玻碳电极；b、向修饰并活化后的玻碳电极表面滴加含一抗的缓冲溶液，室温下孵育1‑4h后用pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液清洗，再用小牛血清蛋白封闭未反应的活性位点并用磷酸盐(PBS)缓冲溶液清洗；c、将抗原滴加到步骤b处理后的电极表面，室温下孵育1‑4h，清洗电极；再将多种量子点标记的二抗滴加到步骤b处理后的电极表面，室温下孵育1‑4h，清洗电极；制得以多种量子点为标记物的多组分ECL免疫传感器；(3)多组分ECL免疫检测i、以步骤(2)制得的多种量子点为标记物的多组分ECL免疫传感器为工作电极，铂电极为对电极、Ag/AgCl电极为参比电极，在含0.01‑0.1mol/L过硫酸铵的磷酸盐缓冲溶液中，对一系列标准浓度的多种抗原溶液进行电致化学发光光谱测试，绘制每种抗原的工作曲线；ii、将待测样品溶液按照步骤i中的方法进行电致化学发光光谱测试，根据所得电致化学发光光谱的信号对应工作曲线，得到待测样品溶液中多种抗原的浓度。