[发明专利]一种基于动态三明治结构的电化学传感器及其制备和应用

摘要

本发明属于生物电化学技术领域，具体涉及一种基于动态三明治结构的电化学传感器及其制备和应用。本发明所述电化学生物传感器，由电极、信号链和反应体系组成，电极采用金电极，信号链为一段单链DNA，DNA链的5’端修饰有巯基，DNA链的3’端修饰有亚甲基蓝，通过巯基与金电极表面自组装形成金‑巯键立于金电极表面，反应体系中含有DNAzyme与必须的反应缓冲体系，DNAzyme可以与信号链互补配对并将其切割成两段DNA短链，DNAzyme上标记有靶蛋白识别元件，可用于定量检测蛋白质或蛋白质间相互作用，本发明操作简单，操作者无需特别训练，适合于偏远地区及资源贫乏地区使用。

主权项

一种基于动态三明治结构的电化学传感器，其特征是由电极、信号链、反应体系和电极检测液组成，电极采用金电极，信号链为一段单链DNA，DNA链的5’端修饰有巯基，DNA链的3’端修饰有亚甲基蓝，通过巯基与金电极表面自组装形成金‑巯键立于金电极表面，反应体系中含有DNA核酶DNAzyme与必须的反应缓冲体系，DNAzyme可以与信号链互补配对并将其切割成两段DNA短链，DNAzyme上标记有靶蛋白识别元件，目标蛋白质结合后，由于蛋白质分子量较大，形成的蛋白质‑核酶复合物在电极表面的扩散受到限制，严重迟滞了核酸酶对底物链的切割，使得MB的氧化电流增大，最后通过MB氧化电流的变化实现目标蛋白的分析,DNA信号链含有16个碱基，序列为5’‑C6‑SH‑CTCACTATrAGGAAGAG‑Methylene blue‑3’，通过金‑巯键固定于金电极表面，所述DNAzyme序列为5’‑Digoxin‑CTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAG‑3’，通过Digoxin直接与目标蛋白结合，所述反应体系为10mM Tris‑HCl，10nM DNAzyme，200mM NaCl，1mM ZnCl2，pH 7.2，所述电极检测液为10mM Tris‑HCl，100mM NaCl，pH 7.4。