[发明专利]水牛卵母细胞体外成熟培养方法在审
| 申请号： | 201610208646.8 | 申请日： | 2016-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN105624100A | 公开（公告）日： | 2016-06-01 |
| 发明（设计）人： | 苏雷 | 申请（专利权）人： | 云南中科胚胎工程生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 昆明祥和知识产权代理有限公司 53114 | 代理人： | 孟蓉英 |
| 地址： | 650000 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明的水牛卵母细胞体外成熟培养方法，其特征在于包括卵母细胞准备、IVM培养小滴制备以及体外成熟培养三个步骤，其采用的体外成熟培养液由TCM199、FBS、oFSH、17β-E2、GSH组成。本发明的水牛卵母细胞体外成熟培养方法，能显著促进卵母细胞的细胞质成熟，解决了目前水牛体外成熟的卵母细胞受精后胚胎体外发育率低的问题；本发明的成熟培养液能促进水牛卵母细胞成熟发育，且对维持卵母细胞和早期胚胎形态有良好作用。 | ||
| 搜索关键词： | 水牛 细胞 体外 成熟 培养 方法 | ||
【主权项】：
水牛卵母细胞体外成熟培养方法，其特征在于包括下列步骤：本发明的水牛卵母细胞体外成熟培养方法，其特征在于包括下列步骤：步骤一，卵母细胞准备：收集水牛卵巢，用含双抗生理盐水进行清洗，将卵巢上的血液洗净，消毒纱布吸干，吸取卵巢上的有腔卵泡，将卵泡液连同卵母细胞复合体（COCs）放入事先添加吸卵液的试管中恒温保存；步骤二，IVM培养小滴制备：在培养皿中放入体外成熟培养液，制备IVM小滴，覆盖上矿物油，放入CO2培养箱中平衡2h；步骤三，体外成熟培养：将步骤一中收集的液体倒入有洗卵液的培养皿中，显微镜下查找卵母细胞，将可用的A、B级卵母细胞移至加有DPBS的培养皿中洗涤，然后在体外成熟培养液中洗涤，将洗涤后的卵母细胞放入步骤二制备的IVM培养小滴中进行成熟培养24～26h，倒置显微镜下观察，卵丘细胞扩散、卵周隙扩大并有第一极体（PBI）排出、胞质均一的为成熟卵母细胞。
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