[发明专利]一种基于JAK-STAT5信号传导通路检测家禽PRL的方法在审
| 申请号： | 201610199735.0 | 申请日： | 2016-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN105802987A | 公开（公告）日： | 2016-07-27 |
| 发明（设计）人： | 施振旦;李辉 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/65;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 杨文晰;孙忠浩 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于JAK‑STAT5信号传导通路检测家禽PRL的方法，具体为：A）提取家禽PRL受体的CDS区序列并插入真核表达载体中,构成信号接收载体；B）将信号应答序列STAT5插入含有报告基因的真核表达载体中；构成信号应答载体;C）将人胚肾293T细胞中加入改良的DMEM培养基中培养，转染信号表达载体和信号应答载体，再分别依次加入不同终浓度的PRL；D)检测报告基因活性，获得报告基因活性随PRL变化曲线；E)重复上述步骤A)‑C），检测样品中报告基因活性，根据报告基因活性随PRL变化曲线，计算得到样品中PRL浓度；本发明方法操作性强、使用成本低、灵敏度高、稳定性和重复性好，可满足科研及家禽养殖检测的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 jak stat5 信号 传导 通路 检测 家禽 prl 方法 | ||
【主权项】：
一种基于JAK‑STAT5信号传导通路检测家禽PRL的方法，其特征在于，步骤如下：A）提取家禽PRL受体的CDS区序列并插入真核表达载体中,构成信号接收载体；B）将信号应答序列STAT5插入含有报告基因的真核表达载体中；构成信号应答载体;C）将人胚肾 293T细胞中加入改良的DMEM培养基中，于37 ℃、5% CO2条件下培养2d，然后接种于96孔板中，继续培养至细胞汇合率为 60%‑70%时，转染信号表达载体和信号应答载体；转染6h后换液，继续培养18h后，分别依次加入终浓度为0、30、60、90ng/ml的PRL，继续培养24h；D)收集细胞，检测报告基因活性，获得报告基因活性随PRL变化曲线；E)重复上述步骤A)‑C），检测样品中报告基因活性，根据步骤D）获得的报告基因活性随PRL变化曲线，计算得到样品中PRL浓度。
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